胰腺星狀細(xì)胞中Hic-5對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究胰腺星狀細(xì)胞（pancreatic stellate cell，PSC）和胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中胰腺星狀細(xì)胞 Hic-5基因表達(dá)下調(diào)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、凋亡、侵襲遷移等生物學(xué)行為能力的影響，為 Hic-5作為胰腺癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的新興標(biāo)志物的研究及基因靶向治療奠定初步的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：1.分別以0 pmol（A組）、6.25 pmol（B組）、12.5 pmol（C組）、25 pmol（D組）和50 pmo

2、l（E組）的siRNA沉默胰腺星狀細(xì)胞的Hic-5基因，轉(zhuǎn)染6小時(shí)后RT-PCR檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組中胰腺星狀細(xì)胞的Hic-5mRNA表達(dá)，免疫熒光法檢測(cè)胰腺星狀細(xì)胞中Hic-5表達(dá)；Western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組胰腺星狀細(xì)胞中的Hic-5蛋白表達(dá)；2.分別以A組、B組、C組、D組和E組胰腺星狀細(xì)胞與相同的胰腺癌細(xì)胞a組、b組、c組、d組、e組行共培養(yǎng)48h；3.共培養(yǎng)結(jié)束后，采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞侵襲

3、遷移能力變化；采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞增殖率變化；采用流式細(xì)胞法檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞凋亡率變化；采用免疫熒光法和 Western blot檢測(cè)各組胰腺星狀細(xì)胞中 MMP-9（matrix metalloproteinases-9，MMP-9）表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.Hic-5表達(dá)在胰腺星狀細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，胰腺星狀細(xì)胞Hic-5 mRNA和Hic-5蛋白表達(dá)量隨Hic-5 siRN

4、A轉(zhuǎn)染濃度增大逐漸減少，與A組比較，C組、D組和E組減少明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各實(shí)驗(yàn)組中胰腺星狀細(xì)胞Hic-5免疫熒光強(qiáng)度隨Hic-5 siRNA轉(zhuǎn)染濃度增大逐漸減少，與A組比較， D組和 E組減少明顯，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2.隨著胰腺星狀細(xì)胞Hic-5 siRNA轉(zhuǎn)染濃度增大，與之對(duì)應(yīng)的各組胰腺癌細(xì)胞相對(duì)遷移距離逐漸減小，與a組比較，d組和e組胰腺癌細(xì)胞相對(duì)遷移距離減小明顯，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

5、P<0.05）；各組胰腺癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少，與a組比較，c組、d組和e組胰腺癌細(xì)胞穿膜數(shù)量減少明顯，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各組胰腺癌細(xì)胞凋亡率逐漸增大；各組胰腺癌細(xì)胞增殖率逐漸減小，與a組比較c組、d組和e組胰腺癌細(xì)胞增殖率有顯著減小，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05）；各組胰腺星狀細(xì)胞MMP-9蛋白表達(dá)量和熒光強(qiáng)度逐漸減少，與 A組比較，C組、D組和 E組細(xì)胞 MMP-9蛋白表達(dá)量和免疫熒光強(qiáng)度減少明顯，其差異