多功能蛋白P62在胰腺癌中的表達(dá)及其對(duì)胰腺癌惡性生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、目的：研究多功能應(yīng)激反應(yīng)蛋白P62在人胰腺癌細(xì)胞系、胰腺癌組織中的表達(dá)狀況，及其對(duì)人胰腺癌細(xì)胞系多種生物學(xué)行為的影響。
　　方法：蛋白印記（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)P62在人胰腺癌SW細(xì)胞、MIA細(xì)胞、Panc-1細(xì)胞、BXPC-3細(xì)胞、ASPC-1細(xì)胞、CAP-2細(xì)胞中表達(dá)狀況；通過(guò)Western Blot和實(shí)時(shí)定量 PCR對(duì)人胰腺癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織的P62差異性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)；采用免疫組化技術(shù)對(duì)20例人胰腺癌組織中p62

2、的表達(dá)狀況進(jìn)行檢測(cè)；構(gòu)建siRNA表達(dá)載體（Si-p62），并運(yùn)用RT-PCR以及Western blot進(jìn)行驗(yàn)證；Si-p62抑制P62的表達(dá)，采用CCK-8法檢測(cè)單純干預(yù)P62基因后五種化療藥對(duì)胰腺癌細(xì)胞系增殖活性的影響；通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默P62表達(dá)后，其對(duì)人胰腺癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能（侵襲、轉(zhuǎn)移）的影響；PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；采用EDU法檢測(cè)細(xì)胞增殖；通過(guò)免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescenc

3、e technique）檢測(cè)P62基因?qū)?xì)胞骨架的影響。
　　結(jié)果：p62在12對(duì)胰腺癌組織中較之于對(duì)應(yīng)的癌旁組織呈明顯的高表達(dá)，P62的高表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。抑制P62基因的表達(dá)水平后對(duì)人胰腺細(xì)胞的細(xì)胞周期（G2/M期）產(chǎn)生了阻滯作用，其增殖活性被明顯抑制，且胰腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移運(yùn)動(dòng)能力也被明顯抑制，而免疫熒光染色顯示，P62干預(yù)的CAP-2細(xì)胞骨架形態(tài)未發(fā)生明顯改變。
　　結(jié)論：
　　1． P62在胰腺癌細(xì)胞