HIF-1α、VEGF對胰腺癌生物學(xué)行為與患者預(yù)后的影響.pdf

1、第一部分 HIF-1ɑ、VEGF及受體在胰腺癌中的表達與其對患者預(yù)后的影響 目的：探討RNA干擾沉默VEGF基因?qū)θ艘认侔┘毎鸅xPC-3誘導(dǎo)血管新生及細胞增殖能力的抑制作用。 方法：設(shè)計合成VEGF-siRNA片段，構(gòu)建慢病毒載體，在體外將siRNA轉(zhuǎn)染BxPC-3細胞。以實時定量PCR、Western blot法檢測細胞內(nèi)VEGF mRNA與蛋白表達情況，以Annexin V-FITC、JC-1標記并用流式細胞檢測細

2、胞凋亡情況，MTT法檢測各組存活細胞數(shù)量變化，LDH法檢測各組細胞受損情況。裸鼠成瘤7天后，瘤周注射VEGF-siRNA慢病毒，與對照比較移植瘤體積變化，并以免疫組化觀察移植瘤內(nèi)VEGF表達情況。 結(jié)果：VEGF-siRNA轉(zhuǎn)染BxPC-3細胞后，細胞VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄水平下降52％、蛋白表達水平下降70％。流式細胞顯示，轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA的細胞凋亡明顯增加。MTT、LDH實驗顯示，感染后細胞存活能力下降、細胞膜損傷嚴

3、重。成瘤實驗中，VEGF-siRNA治療組成瘤體積明顯小于對照組，治療組平均體積為188.33±17.33mm3，對照組平均體積為301.62±21.30 mm3（P<0.05）。與對照組相比，治療組裸鼠移植瘤切片免疫組化證實VEGF表達水平明顯降低。 結(jié)論：利用VEGF-siRNA沉默VEGF基因可有效抑制胰腺癌細胞合成、表達VEGF，以此促進細胞凋亡，抑制腫瘤生長。 第二部分RNA干擾沉默VEGF基因?qū)σ认侔〣xPC

4、-3生物學(xué)行為的影響 目的：探討胰腺癌中低氧誘導(dǎo)因子-1ɑ（HIF-1ɑ）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、VEGF受體1（VEGFR1/Flt-1）、受體2（VEGFR2/Flk-1）對胰腺癌微血管密度（MVD）的影響，以及這些蛋白的表達與根治性手術(shù)后胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。 方法：收集5年來我院50例行胰十二指腸根治術(shù)的胰腺癌患者蠟塊病理標本，用免疫組化法測HIF-1ɑ、VEGF、VEGFR1、VEGFR2的表達。以CD

5、34單克隆抗體顯示腫瘤內(nèi)皮細胞，計算腫瘤內(nèi)MVD，15例陰性胰腺切緣作為對照組。電話隨訪患者術(shù)后生存期，研究HIF-1ɑ、VEGF及受體VEGFR1、VEGFR2在胰腺癌中的表達與其對預(yù)后的影響。 結(jié)果：去除5位因并發(fā)癥圍手術(shù)期死亡患者，共隨訪45人，隨訪率為100％。胰腺癌組織HIF-1α、VEGF及受體R1、R2高表達，陽性率分別為82％、84％、80％和84％，明顯高于對照組（P<0.05）。腫瘤MVD明顯高于對照組（P<

6、0.0001）。癌組織中，HIF-1α表達與VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達正相關(guān)（P<0.05）。VEGF與VEGFR1、VEGFR2表達正相關(guān)（P<0.05）。VEGF、VEGFR1與VEGFR2表達與腫瘤MVD正相關(guān)（P<0.05）。HIF-1α與腫瘤組織分化及患者預(yù)后負相關(guān)，VEGF、VEGFR1、VEGFR2、MVD與患者預(yù)后負相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論：胰腺癌中HIF-1α影響腫瘤分化，并能促進VEGF、V