降低DICER和DROSHA表達水平對胰腺癌細胞系生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　研究調(diào)控miRNA成熟過程中的關(guān)鍵酶DICER和DROSHA表達水平的變化對胰腺癌細胞系SW-1990和ASPC-1的侵襲、凋亡、增殖以及細胞周期的影響，從而為早期診斷胰腺癌并且能夠靶向治療奠定重要的基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　方法：
　　選擇胰腺癌細胞系（BXPC-3、PANC-1、SW1990、ASPC-1和MIA-Paca-2）中DICER和DROSHA的表達水平較高的細胞系SW-1990和ASPC-1，利用

2、脂質(zhì)體(lipo2000)將siRNA轉(zhuǎn)入選出的兩種細胞系，降低DICER基因與DROSHA基因的mRNA的表達水平，并用Real-time PCR確定DICER和DROSHA表達水平降低75％以上。用 MTT法、transwell小室法分別測細胞的增殖和侵襲能力。并用流式細胞技術(shù)鑒定細胞的周期特征和凋亡程度。運用SPASS19.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　降低DICER mRNA在胰腺癌細胞系SW1990、ASP

3、C-1中的表達約75％之后，兩種腫瘤細胞的增殖均受到抑制。ASPC-1與SW-1990細胞受干預(yù)48h后，其增值受抑制程度分別為25％和31％；受干預(yù)72h后受抑制的程度分別為20％和32％。二者侵襲能力也被不同程度的削弱。受干預(yù)48h，二者的侵襲能力分別降低58％和33％。當DICER的表達降低后，處于G2期的細胞的比例明顯增多，處于S期的細胞比例明顯減少。但是對兩種細胞系的凋亡卻無顯著影響。而降低DROSHA mRNA的表達后，對二

4、者的侵襲、增殖、和細胞周期以及細胞凋亡均未發(fā)現(xiàn)有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　DICER與DROSHA均是調(diào)節(jié)miRNA的關(guān)鍵酶，但在同種細胞系中分別降低二者的表達后，只有DICER對細胞的生物學(xué)行為有影響，提示我們細胞的DICER在調(diào)節(jié)胰腺癌腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著主導(dǎo)作用。DICER的缺失會造成Pre-miRNA的堆積。另外，DICER或者DROSHA的缺失也會使成熟miRNA的表達譜的改變。因此推測DICER在