基于IKKε靶點(diǎn)的氨來占諾對(duì)非酒精性脂肪性肝病的干預(yù)研究.pdf

1、目的：本研究將用高脂飼料誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝小鼠模型，同時(shí)聯(lián)合IKKε激動(dòng)劑LPS加重肝臟負(fù)荷，再用IKKε特異性抑制劑氨來占諾分別進(jìn)行干預(yù)，以判斷基于IKKε靶點(diǎn)的氨來占諾是否對(duì)非酒精性脂肪性肝病具有保護(hù)性作用，并對(duì)其保護(hù)性機(jī)制做初步探究。
　　方法：(1)氨來占諾對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝的療效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)：C57BL/6小鼠40只隨機(jī)分為四組，即正常對(duì)照組（NC組）、高脂組（HFD組）、脂多糖組（HFD+LPS組）、氨來占諾組（HFD+

2、AM組），模型及實(shí)驗(yàn)組用高脂喂養(yǎng)18周，HFD+LPS組予以皮下注射125μg/kg/d LPS，HFD+AM予以25mg/kg/d氨來占諾灌胃，摘除小鼠眼球取血后處死，進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)；(2)每周測(cè)量各組小鼠體重，于第4周、第8周時(shí)代謝籠采集不同組小鼠攝食量；第10周、第18周行糖耐量試驗(yàn)；(3)18周處死小鼠，取肝臟組織行HE、油紅O染色；取血清用生化試劑盒檢測(cè)TG、TC、ALT、AST水平，ELISA法測(cè)定血清TNF-α、FFA水平；

3、(4) qPCR法檢測(cè)肝臟中IKKε、p65、G6P、PCK1、PKLR、FAS、SREBP1、PPARα、CD36的 mRNA的表達(dá)，Western blotting法檢測(cè)肝臟組織IKKε、NF-κB p65的表達(dá)。（5）氨來占諾對(duì)LPS誘導(dǎo)下的NAFLD的干預(yù)作用實(shí)驗(yàn)：C57BL/6小鼠30只隨機(jī)分為三組，即高脂組（HFD組）、脂多糖組（HFD+LPS組）、脂多糖+氨來占諾組（HFD+LPS+AM組），用高脂喂養(yǎng)18周， HFD+L

4、PS+AM予以125μg/kg LPS皮下注射12周后，改為25mg/kg/d氨來占諾灌胃6周，摘除小鼠眼球取血后處死，進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)；(6)每周測(cè)量各組小鼠體重，于第18周時(shí)代謝籠采集不同組小鼠攝食量；第18周行糖耐量試驗(yàn)；(7)18周處死小鼠，取肝臟組織行HE、油紅O染色；取血清檢測(cè)TG、TC、ALT、AST、 TNF-α、FFA水平；(8) qPCR法檢測(cè)肝臟中 IKKε、p65、G6P、PCK1、PKLR、FAS、SREBP1、P

5、PARα、CD36的mRNA的表達(dá)、Western blotting法檢測(cè)肝臟組織IKKε、NF-κB p65的表達(dá)；(9)最后利用SPSS18.0軟件包對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：(1)根據(jù)氨來占諾對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝的療效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)，可以得出AM較HFD組體脂減少明顯（p<0.05），LPS增加體脂效應(yīng)較單純高脂飼料更強(qiáng)（p<0.05），并且兩者影響效應(yīng)不隨食物攝入量改變。(2)肝臟

6、病理學(xué)提示AM能減輕肝臟脂肪變性程度，AM組的肝重、肝臟甘油三酯含量較HFD組降低（p<0.05），同時(shí)血清甘油三酯、膽固醇水平與HFD組相比下降明顯（p<0.05）；LPS則促進(jìn)肝臟脂肪空泡形成，與 HFD組相比進(jìn)一步增加肝重（p<0.05）、肝臟甘油三酯含量（p<0.05），增加血甘油三酯含量（p<0.05），但不影響血清ALT、AST水平（p>0.05）；(3) AM減少HFD引起的高血糖，第10周時(shí)OGTT2h、3h血糖較HFD

7、組降低（p<0.05），但曲線下面積無差異（p>0.05）；第18周時(shí)OGTT1h、2h、3h血糖及曲線下面積較HFD組降低（p<0.05），血清胰島素水平和胰島素抵抗程度均較HFD組下降（p<0.05）；LPS組較HFD組進(jìn)一步加重OGTT1h（第10周），OGTT0h、1h、2h（第18周）血糖，增加血糖曲線下面積（p<0.05）；LPS組與HFD組相比不影響空腹血胰島素水平（p>0.05），但加重胰島素抵抗程度（p<0.05）；(

8、4) AM減少HFD引起的高TNF-α、高FFA水平（p<0.05），LPS則進(jìn)一步增加了TNF-α、FFA水平（p>0.05）。(5)根據(jù)氨來占諾對(duì)LPS誘導(dǎo)下的NAFLD的逆轉(zhuǎn)作用實(shí)驗(yàn)，可以得出HFD+LPS+AM組體重從13周起明顯低于HFD+LPS組（p<0.05），且該作用并不取決于對(duì)食欲的影響；(6)肝臟病理學(xué)提示HFD+LPS+AM組肝臟脂肪變性和脂肪空泡較HFD+LPS組明顯減少（p<0.05）， AM能減少HFD+LP

9、S誘導(dǎo)下的肝重、肝臟甘油三酯含量、高脂血癥，但不改變血清ALT、AST水平（p>0.05）；(7) AM可降低HFD+LPS組誘導(dǎo)的1h、2h、3h的血糖值，曲線下面積較 HFD+LPS組也減少（p<0.05），同時(shí) HFD+LPS+AM組胰島素水平較HFD+LPS組降低，胰島素抵抗程度得到緩解（p<0.05）；(8) AM可減少HFD+LPS誘導(dǎo)和加重的血清高FFA、TNF-α水平（p<0.05）；(9)療效機(jī)制方面，AM能從mRNA

10、和蛋白層面減少HFD組、HFD+LPS組的IKKε、p65水平（p<0.05）。同時(shí)AM能降低HFD組、HFD+LPS組的高 FAS、SREBP1、CD36水平（p<0.05），而PPARα在HFD組與HFD+AM組間無差異（p>0.05）。AM能同時(shí)降低HFD組、HFD+LPS組的G6P、PKLR水平（p<0.05），但對(duì)HFD組的PCK1無抑制作用（p>0.05）。
　　結(jié)論：(1)氨來占諾通過改善胰島素抵抗、減輕肝臟炎性反應(yīng)