擬南芥生長(zhǎng)素響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子ARF16生物學(xué)功能的初步探究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：學(xué)校代碼：10373密級(jí)：學(xué)號(hào)：11015071118碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目：目：擬南芥生長(zhǎng)素響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子擬南芥生長(zhǎng)素響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子ARF16ARF16生物學(xué)功能的初步探究生物學(xué)功能的初步探究論文作者論文作者：張停停張停停指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師：李小平李小平專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：植物學(xué)植物學(xué)研究方向研究方向：植物分子生物學(xué)植物分子生物學(xué)淮北師范大學(xué)研究生處二○一三年五月摘要I擬南芥生長(zhǎng)素響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子ARF16生物學(xué)功能的初步探究張停停

2、（植物學(xué)）摘要：摘要：生長(zhǎng)素響應(yīng)因子ARFs（Auxinresponsefact）是可以結(jié)合到生長(zhǎng)素響應(yīng)基因的啟動(dòng)子上的轉(zhuǎn)錄因子，這些基因啟動(dòng)子含有多個(gè)串聯(lián)生長(zhǎng)素反應(yīng)元件AuxRE（auxinresponseelement）。ARFs和AuxRE上的TGTCTC特異性結(jié)合來(lái)充當(dāng)生長(zhǎng)素早期響應(yīng)基因的抑制子和活化子。ARFs和AuxRE在調(diào)控生長(zhǎng)素響應(yīng)基因的表達(dá)上起到重要的調(diào)控作用。在ARF家族中ARF10、ARF16和ARF17具有高度的

3、序列同源性，它們組成了一個(gè)ARF家族下的亞家族。miR160對(duì)靶基因ARF10、ARF16和ARF17的負(fù)調(diào)控作用對(duì)生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。通過(guò)對(duì)mRNA結(jié)合miR160位點(diǎn)上同義核苷酸序列的替換得到抗miR160的突變體，從而可以用來(lái)研究ARF10、ARF16和ARF17的生物學(xué)功能。本文通過(guò)對(duì)ARF16的mRNA與miR160結(jié)合位點(diǎn)同義核苷酸序列的替換得到mARF16。將編碼GFP熒光蛋白的序列融合到mARF16的cD

4、NA中，將融合的片段插入到含有35S啟動(dòng)子的載體上獲得35S：mARF16GFP。通過(guò)農(nóng)桿菌真空滲透法轉(zhuǎn)染擬南芥，從而獲得轉(zhuǎn)基因植株mARF16。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的篩選獲得了具有明顯表型的mARF16轉(zhuǎn)基因植株，在生長(zhǎng)的幼苗階段與野生型Col0相比觀察不到明顯的區(qū)別；但在第57片蓮座葉長(zhǎng)出的時(shí)候則表現(xiàn)出明顯的區(qū)別，mARF16的葉片從葉緣開(kāi)始向內(nèi)卷曲，葉片的表面也開(kāi)始變得粗糙；在莖長(zhǎng)出后mARF16的分枝明顯的受到抑制，頂端優(yōu)勢(shì)更加明顯

5、，莖稈的支撐能力下降推測(cè)其中的維管組織發(fā)育可能異常；同時(shí)觀察發(fā)現(xiàn)mARF16的花器官發(fā)育不全，花的萼片和花瓣均有退化的現(xiàn)象，變得更細(xì)更長(zhǎng)使花的結(jié)構(gòu)比較分散，而且雄蕊較野生型的變得更短，這可能是導(dǎo)致其果莢的結(jié)實(shí)率較低的一個(gè)因素；在較早期的果莢中幾乎是沒(méi)有產(chǎn)生可育性的種子，隨著植株的長(zhǎng)高頂端的果莢種子是可育的，但是通過(guò)對(duì)果莢大小和外形的觀察看，與野生型Col0的果莢還是具有很大的差距的，一方面果莢的長(zhǎng)度和外形都不正常，果莢僅為野生型的23，