正交試驗(yàn)法優(yōu)選火炬樹果穗提取工藝.pdf

1、目的:
　　以高效液相色譜法為檢測(cè)手段，以提取出沒食子酸的量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，使用正交試驗(yàn)法優(yōu)選火炬樹果穗中酚酸類成分的提取工藝;確定最佳提取工藝后，對(duì)提取物進(jìn)行清除DPPH自由基的體外抗氧化試驗(yàn)，考察其抗氧化能力。
　　方法:
　　1)以沒食子酸為對(duì)照品，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱、甲醇-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)選擇273nm，繪制沒食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察方法的線性與范圍、精密度、重復(fù)性、準(zhǔn)確度，建立高效液

2、相色譜法測(cè)定沒食子酸的方法。
　　2)分別研究提取溶劑、提取時(shí)間、提取溶劑用量和提取次數(shù)對(duì)回流提取法和超聲提取法火炬樹果穗中沒食子酸提取效率的影響，使用單因素法和正交實(shí)驗(yàn)法確定最佳提取工藝。
　　3)采用DPPH法考察火炬樹果穗提取物清除DPPH自由基的能力，評(píng)價(jià)兩種提取物的體外抗氧化能力。
　　結(jié)果:
　　1)用HPLC法測(cè)定果穗中沒食子酸的含量，采用的流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸水溶液(15∶85)，流速為1m

3、l·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm。該方法沒食子酸在0-71.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=22.615x+6.941，線性回歸系數(shù)R=0.9993。該方法具有良好的精密度(RSD=1.43％)、重復(fù)性(RSD=1.19％)、準(zhǔn)確度(RSD=1.88％)，且在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好(RSD=2.15％)，可以使用。
　　2)正交試驗(yàn)結(jié)果表明回流提取法火炬樹果穗中沒食子酸的最佳提取工藝為條件為A3B2C1D3，即回

4、流時(shí)間為4h，乙醇濃度為50％，料液比為1∶5，提取次數(shù)為3次。按照該條件重復(fù)試驗(yàn)3次，三次沒食子酸的提取量分別為4.509mg·g-1，4.547mg·g-1，4.540mg·g-1，其平均值為4.532mg·g-1。超聲提取法提取火炬樹果穗總沒食子酸的最佳提取工藝條件為A3B3C2D1，即乙醇濃度為50％，超聲時(shí)間為40 min，料液比為1∶6，提取次數(shù)為1次。按照該條件重復(fù)試驗(yàn)3次，三次沒食子酸的提取量分別為4.541 mg·g-

5、1，4.550mg·g-1，4.542mg·g-1，其平均值為4.544mg·g-1。兩種提取工藝提取出火炬樹果穗中沒食子酸的含量基本一致，超聲提取法對(duì)火炬樹果穗中沒食子酸的提取率略高于回流提取法。
　　3)對(duì)采用兩種方法提取出的火炬樹果穗提取無進(jìn)行清除DPPH自由基的體外抗氧化試驗(yàn)，回流提取法所得提取物的IC50=5.117mg·ml-1，而超聲提取法所得提取物的IC50=5.044mg·ml-1，略高于回流提取法所得提取物的I

6、C50說明超聲提取法提取出的火炬樹浸膏清除DPPH自由基的能力略強(qiáng)于回流提取法，這個(gè)結(jié)果與兩種方法提取出的沒食子酸的含量一致，說明火炬樹果穗中的抗氧化成分多為酚酸類成分，且回流提取和超聲提取兩種提取方法對(duì)火炬樹果穗中沒食子酸的提取效果均較好。但由于超聲提取法無需高溫，提取效率高，藥材原料處理量大，可以大大減少能耗，提高效率。因此超聲提取法優(yōu)于回流提取法。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定火炬樹果穗中沒食子酸的含量