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文檔簡介
1、S100A16蛋白是一種在人體組織中廣泛表達的蛋白,其屬于S100蛋白家族,具有調節(jié)細胞內外鈣離子平衡的功能,在體內發(fā)揮著廣泛的生物學功能。目前的研究表明S100A16除了影響多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展外還與脂肪細胞的分化及脂質的聚集密切相關。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)在小鼠前脂肪細胞(3T3-L1)中干擾肥胖相關基因11β-羥基類固醇脫氫酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type1,11β-HSD1)的表達
2、后,S100A16的表達也下調約60%,而在細胞內過表達S100A16后11β-HSD1的表達也上調。因此推測在脂質的代謝過程中S100A16與11β-HSD1可能共同發(fā)揮了重要的生物學功能,但其具體機制目前并不清楚。因此本研究通過構建動物模型及細胞模型,探討S100A16與11β-HSD1蛋白對糖脂代謝及脂肪細胞分化的共同影響。
首先,利用已構建的S100A16全身高表達的轉基因小鼠(S100A16Tg-/+)與正常C57B
3、L/6小鼠為實驗對象。選擇5周齡大小的S100A16Tg-/+與正常C57BL/6雄性小鼠各20只,將兩種基因型的小鼠隨機分為正常飲食組和高脂飲食組,即一共四組:C57BL/6小鼠給予正常飲食組(n=10); S100A16Tg-/+小鼠給予正常飲食組(n=10);C57BL/6小鼠給予高脂飲食組(n=10); S100A16Tg-/+小鼠給予高脂飲食組(n=10)。每周稱量并記錄小鼠體重。在相應飲食喂養(yǎng)的第8和16周時進行腹腔葡萄糖耐
4、量試驗(Introperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)及胰島素耐量試驗(Insulin tolerance test,ITT)。喂食17周后取血,檢測血漿甘油三脂(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High densitylipoprotein,HDL)及低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)等生化指標,記
5、錄內臟脂肪重量,并采用HE染色方法(hematoxylin and eosin staining,HE)觀察脂肪組織內細胞改變及肝臟組織脂肪變性的程度。同時應用Western blotting方法檢測脂肪及肝臟組織中S100A16及11β-HSD1表達的改變。有研究表明,高脂飲食下S100A16及11β-HSD1的表達上調促進了機體腹部脂肪的聚集及體重的增加,并使得小鼠血清中TC、LDL急劇升高,加重了小鼠血脂代謝異常。同時加重了肥胖時
6、糖耐量異常及降低了組織胰島素敏感性。
其次,本課題組構建了S100A16及11β-HSD1過表達質粒,以3T3-L1細胞為模型,通過細胞轉染上調細胞內S100A16及11β-HSD1的表達,并進行誘導分化,觀察不同處理下細胞的分化程度及脂滴的聚集情況。研究表明,S100A16及11β-HSD1均可以單獨促進3T3-LI細胞向成熟脂肪細胞分化,當細胞中S100A16及11β-HSD1表達同時上調時,其促進細胞分化能力顯著增強,細
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