11βHSD1通過(guò)限制有氧糖酵解抑制肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：觀察11βHSD1和11βHSD2在人HCC標(biāo)本組織（Hepatocellular carcinoma tissue，HCT）及配對(duì)的癌旁無(wú)瘤標(biāo)本組織（Adjacent non-cancerous tissue，ANT）中的表達(dá)，并結(jié)合相應(yīng)的隨訪資料，探討11βHSD1和11βHSD2的表達(dá)與HCC患者臨床病理因素以及預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法：隨機(jī)選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院肝臟外科中心2004年10月至2014年

2、5月間手術(shù)切除治療并經(jīng)組織病理學(xué)確診的310例HCC患者的HCT及相應(yīng)ANT，采用免疫組織化學(xué)染色（Immunohistochemistry stainning，IHC）、蛋白免疫化學(xué)印記（Western blotting，WB）等技術(shù)，以自身為配對(duì)，結(jié)合臨床病理因素及隨訪資料分析11βHSD1和11βHSD2的表達(dá)。
　　結(jié)果：11βHSD1和11βHSD2在HCT中表達(dá)不相同，與相應(yīng)的ANT相比，11βHSD1在HCT中表達(dá)水

3、平明顯下降（p＜0.001）；11βHSD2在HCT與ANT中表達(dá)未檢測(cè)出顯著差異。結(jié)合臨床病理及隨訪資料分析結(jié)果提示，11βHSD1的表達(dá)水平與 HCC相關(guān)因素如性別、年齡、乙肝病史、丙肝病史、血吸蟲病史、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、腫瘤結(jié)節(jié)直徑、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目、門靜脈癌栓、腫瘤包膜完整性、血管浸潤(rùn)、周圍侵犯、淋巴浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度、Edmondson-Steiner分級(jí)、Child-Pugh分級(jí)、TNM分級(jí)、BCLC分級(jí)、血糖、A

4、LT、AST、總膽紅素、直接膽紅素、γ-GT、ALP、ALB、膽固醇、PT、AFP、CEA、CA199、ICG和循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目（CTC）等的相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，11βHSD1在HCT中表達(dá)水平與腫瘤結(jié)節(jié)直徑、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目、門靜脈癌栓、腫瘤包膜完整性、血管浸潤(rùn)、CTC、糖尿病史、血糖、分化程度、Edmondson-Steiner分級(jí)、Child-Pugh分級(jí)、TNM分級(jí)、BCLC分級(jí)顯著相關(guān)；生存分析顯示11βHSD1低表達(dá)的HCC患

5、者具有較高的術(shù)后復(fù)發(fā)率和較低的總體生存率。
　　結(jié)論：11βHSD1在HCT中主要呈低表達(dá)，且往往提示HCC患者較差的預(yù)后。
　　目的：本文以SMMC-7721、BEL7402肝癌細(xì)胞系為研究工具，通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)和敲減11βHSD1的肝癌細(xì)胞系研究其腫瘤生物學(xué)行為的變化探討11βHSD1在肝癌進(jìn)展的作用。
　　方法：利用慢病毒為工具構(gòu)建過(guò)表達(dá)11βHSD1的肝癌細(xì)胞系7721 HSD11B1，利用siRNA構(gòu)建敲減11

6、βHSD1的肝癌細(xì)胞系7402 siHSD11B1。Transwell細(xì)胞遷移，侵襲實(shí)驗(yàn)判定腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲。體內(nèi)利用肝癌的裸鼠門靜脈注射模型、原位種植誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移模型評(píng)定11βHSD1過(guò)表達(dá)/敲減的肝癌細(xì)胞系與野生型細(xì)胞系轉(zhuǎn)移能力的差異；用CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、瓊脂糖克隆實(shí)驗(yàn)評(píng)判細(xì)胞細(xì)胞增殖能力的差異，腫瘤細(xì)胞裸鼠皮下成瘤模型評(píng)估腫瘤體內(nèi)成瘤性差異。
　　結(jié)果：11βHSD1過(guò)表達(dá)抑制SMMC-7721體外和體內(nèi)的增殖、

7、侵襲和轉(zhuǎn)移能力。7402 siHSD11B1因重度酸中毒不能存活。
　　結(jié)論：11βHSD1對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移起抑制作用。
　　目的：研究11βHSD1是否通過(guò)葡萄糖代謝通路調(diào)控肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為；
　　方法：Western blotting檢測(cè)腫瘤遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)，膠原酶相關(guān)的MMP1和MMP13，明膠酶相關(guān)的MMP2和MMP9，基質(zhì)溶素相關(guān)的MMP3和MMP11，金屬蛋白酶相關(guān)MMP12，膜型基質(zhì)

8、金屬蛋白酶MMP14和MMP17，以及其他MMP21；轉(zhuǎn)移與血管形成和擬態(tài)相關(guān)指標(biāo)HIF1α、VEGF、Angptl4和COX2；細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)，轉(zhuǎn)錄因子c-Myc，抑癌基因Rb，細(xì)胞周期蛋白Cyclin A2、Cyclin D1、Cyclin E1，細(xì)胞周期蛋白依靠性激酶抑制劑p21Cip1和p27Kip1以及細(xì)胞周期依賴激酶CDK4和CDK2；葡萄糖攝取和糖酵解關(guān)鍵酶，GLUT1、GLUT4、HK2、GAPDH、PKM2、L

9、DHα和PDH；以及細(xì)胞能量狀態(tài)感受器AMPK的表達(dá)。CO-IP分析11βHSD1與AMPK的相互作用。
　　結(jié)果：11βHSD1能夠下調(diào)遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)的MMP2，MMP3，MMP9，MMP12；轉(zhuǎn)移、血管形成和擬態(tài)相關(guān)的HIF1α、VEGF、Angptl4和COX2；細(xì)胞增殖與生長(zhǎng)相關(guān)的c-Myc，p-RbSer811，Cyclin A2、Cyclin D1、Cyclin E1、p21Cip1和CDK4；葡萄糖攝取和糖酵解關(guān)鍵酶