葡萄柚提取物漱口液對(duì)變異鏈球菌和伴放線放線桿菌抑制作用的研究.pdf

1、齲病和牙周病均是由牙菌斑引起的感染性疾病。變異鏈球菌（Streptococcus mutans，S.mutans，簡(jiǎn)稱變鏈菌）和伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetem-comitans，Aa)是口腔菌斑的重要組成菌，以菌斑生物膜的形式存在于口腔。變鏈菌是主要致齲菌，與齲病的發(fā)生有密切關(guān)系，而Aa與局限型侵襲性牙周炎密切相關(guān)，和慢性牙周炎也有一定的關(guān)系。葡萄柚提取物（grapefruit-seed ext

2、ract，GSE）是一種純天然植物提取物，其內(nèi)含有大量具有抗氧化能力的多酚類物質(zhì)，近年研究發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲作用，同時(shí)具有很好的生物相容性。GSE漱口液全部采用可食用級(jí)原料，不含乙醇、氯、碘、四環(huán)素、甲硝唑等成份，對(duì)口腔黏膜無(wú)刺激，也不會(huì)造成牙表面、黏膜表面染色，更不會(huì)引發(fā)諸如：味蕾的味覺降低、抑制唾液的分泌、口干、灼痛、皮疹等不良反應(yīng)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)GSE漱口液具有良好的菌斑抑制能力，但其具體作用機(jī)制未完全

3、明了。因此本研究通過GSE漱口液對(duì)變鏈菌黏附影響和其對(duì)變鏈菌和Aa的抗菌作用以及激光共聚焦掃描顯微鏡（ConfocAlLaser Scanning Microscopy，CLSM）觀察其作用后變鏈菌生物膜的變化，旨在探討其用于預(yù)防和治療牙齦炎、牙周炎和齲病的可行性和機(jī)理，為其在臨床口腔疾病治療中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究包括三部分實(shí)驗(yàn)：
　　 實(shí)驗(yàn)一 葡萄柚提取物溶液對(duì)變鏈菌黏附作用的影響
　　 目的：研究GSE溶液對(duì)變

4、鏈菌在光滑玻璃表面黏附的影響。方法：將GSE漱口液用二倍稀釋法稀釋成不同濃度的GSE溶液（1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256 漱口液原液濃度），通過測(cè)定光密度值研究黏附細(xì)菌量的變化，反映其對(duì)變鏈菌在光滑玻璃表面黏附作用的影響；掃描電鏡觀察變鏈菌在玻片上的形態(tài)特征。結(jié)果：變鏈菌對(duì)光滑玻璃的黏附隨GSE溶液濃度的升高而下降；掃描電鏡顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)菌間基質(zhì)少，菌細(xì)胞清晰，空白組細(xì)菌則包裹有較多的不定形物

5、質(zhì)。結(jié)論：一定濃度的GSE溶液（≥1/128漱口液原液濃度）具有抑制變鏈菌在光滑玻璃表面黏附的作用。
　　 實(shí)驗(yàn)二 葡萄柚提取物溶液對(duì)變鏈菌和伴放線放線桿菌抗菌作用的研究
　　 目的：研究GSE溶液對(duì)Aa和變鏈菌的抗菌活性，初步探討其抗菌機(jī)制。方法：采用液體稀釋法測(cè)定GSE溶液（1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024 漱口液原液濃度）對(duì)Aa和變鏈菌的最小抑制

6、濃度和最小殺菌濃度；同時(shí)掃描電鏡下觀察GSE溶液（1/16漱口液原液濃度）對(duì)變鏈菌細(xì)胞壁的影響。 結(jié)果：GSE溶液對(duì)Aa的MIC為1/64漱口液原液濃度，MBC為1/32漱口液原液濃度；對(duì)變鏈菌的MIC為1/32漱口液原液濃度，MBC為1/16漱口液原液濃度，掃描電鏡觀察顯示，MBC濃度GSE（相當(dāng)于漱口液原液濃度的1/16）溶液處理后的變鏈菌出現(xiàn)細(xì)胞壁破裂，內(nèi)容物溢出。結(jié)論：GSE溶液對(duì)體外培養(yǎng)的Aa和變鏈菌有明顯的抑制和殺滅作用，其

7、抑制機(jī)制可能與其中的GSE破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的完整性有關(guān)。
　　 實(shí)驗(yàn)三 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察葡萄柚提取物漱口液抗變鏈菌生物膜效果
　　 目的：觀察GSE漱口液對(duì)不同階段變鏈菌生物膜的作用效果，并與西吡氯銨漱口液相比較。方法：體外形成3h、24h、48h變鏈菌生物膜模型，用GSE漱口液分別作用1min后，熒光染料染色生物膜中的死菌和活菌，CLSM觀察并比較漱口液處理前后活菌百分比的變化。結(jié)果：GSE漱口液可降低3h變鏈菌