小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun表達及其與損傷時間相關性的研究.pdf

1、目的：皮膚損傷愈合是一個復雜而連續(xù)的過程，包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、結締組織收縮和纖維化等過程。原癌基因c—jun是即刻早期基因jun家族成員之一，屬于堿性亮氨酸拉鏈家族核內轉錄因子成員，可以結合在許多基因的啟動子上參與基因轉錄的調控，其表達產物在多種基因表達、細胞凋亡、增殖、分化等過程中起重要作用。本研究應用免疫組織化學染色和Western blot技術，檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時間段c—jun表達的變

2、化情況，探討c—jun在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。 方法：健康成年(8周齡)清潔級昆明系小鼠55只，雌雄不限，體質量35～40g，隨機分為11組。其中皮膚切創(chuàng)分為10個時間段組，另一組為正常對照組，每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，常規(guī)手術消毒，在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口，深達筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎

3、處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。對照組小鼠麻醉后背部剪毛，不做切創(chuàng)，觀察至14d，脫頸椎處死，取相同部位同等大小皮膚，以備HE染色、免疫組織化學染色和Western blot檢測應用。應用免疫組織化學染色和Western blot技術檢測55例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時間段c—jun變化情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野，計數(shù)細胞總數(shù)、陽性細胞數(shù)及陽性細胞率。應用Fluoc

4、hemV2.0軟件檢測各時間段的平均光密度值，測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進行單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果：正常對照組小鼠皮膚中c—jun主要表達在表皮、毛囊和皮脂腺等處。傷后3h即可見少數(shù)多核粒細胞有c—jun表達。傷后6—24h，大量浸潤的多核粒細胞和部分單個核細胞c—jun呈陽性。傷后1～3d，c—jun陽性細胞主要以單個核細胞和成纖維細胞為主

5、。傷后5～14d，c—jun主要在成纖維細胞中表達。傷后0h時c—jun陽性細胞率比較低，隨著傷后時間的延長，c—jun陽性細胞率逐漸增加，12h達到高峰。傷后1～5d一直呈高表達狀態(tài)。傷后7d時c—jun陽性細胞率達到第二峰，隨后逐漸下降。除傷后1d與3d陽性細胞率差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05)，其它各組與相鄰上組的細胞總數(shù)及陽性細胞率差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Western blot結果顯示正常對照皮膚內有c—jun陽

6、性條帶，皮膚切創(chuàng)傷后各時間段組c—jun表達強度有一定規(guī)律。傷后0～12h，表達逐漸增強；12h達高峰。1～5d稍有下降；傷后7d，c—jun表達稍有上升，隨后表達漸降低。但12h組中c—jun表達相對較多，到14d時，c—jun基本與對照組表達情況一致。除0h與對照組間平均光密度值差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05)，其余各組間平均光密度值差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論：1、正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中