結(jié)核分枝桿菌誘導(dǎo)的人巨噬細(xì)胞蛋白質(zhì)組研究及快生菌構(gòu)建探索.pdf

1、就發(fā)病率和死亡率而言，結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,M.tb）引起的世界第二大傳染病。長期以來，M.tb的感染機(jī)制一直是結(jié)核病研究領(lǐng)域中懸而未決的基本科學(xué)問題之一。為此，本研究利用TMT(Tandem Mass Tag)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，通過對巨噬細(xì)胞感染M.tb后蛋白質(zhì)組的系統(tǒng)研究及后續(xù)生物學(xué)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)了一批在感染過程中受M.tb毒力調(diào)控且影響宿主細(xì)胞命運(yùn)的候選蛋白，為進(jìn)一步解析巨噬細(xì)

2、胞應(yīng)對M.tb侵染的免疫機(jī)制提供了豐富依據(jù)。具體結(jié)果如下:
　　1)在巨噬細(xì)胞分別感染H37Rv（強(qiáng)毒株）和H37Ra（弱毒株）的差異蛋白質(zhì)組研究中，共鑒定到6，702個(gè)蛋白，其中235個(gè)為差異表達(dá)蛋白，并通過Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了部分蛋白的差異表達(dá)。這些蛋白涉及細(xì)胞凋亡、凝血和氧化磷酸化等生物學(xué)過程，并初步揭示了宿主細(xì)胞分別感染兩種M.tb后的四種不同機(jī)制。
　　2)在上述差異表達(dá)蛋白中，AHSG蛋白為抗炎性因

3、子，基因敲降實(shí)驗(yàn)證明AHSG蛋白通過凋亡途徑幫助M.tb逃避免疫。凝血因子10(F10)是凝血酶通路中的一員，可以代替補(bǔ)體結(jié)合到病毒表面激活免疫反應(yīng)，通過ELISA實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明F10蛋白可以與分枝桿菌結(jié)合。本研究首次初步揭示AHSG蛋白和F10蛋白在巨噬細(xì)胞感染M.tb后免疫反應(yīng)中的作用，其具體機(jī)制還需后續(xù)深入研究。
　　3)γ-干擾素是激活巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因子。M.tb分別侵染γ-干擾素激活前后的巨噬細(xì)胞，共鑒定

4、到257個(gè)差異表達(dá)蛋白，并通過Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了部分蛋白的差異表達(dá)。這些差異蛋白涉及細(xì)胞凋亡、抗原遞呈和凝血等生物學(xué)過程。分析結(jié)果表明，γ-干擾素通過增強(qiáng)感染后巨噬細(xì)胞對抗原的呈遞能力提高機(jī)體對M.tb的免疫。
　　由于M.tb的慢生長特性（大約是大腸桿菌生長速率的1/50-1/70）極大地制約了結(jié)核病的診斷、藥物研發(fā)和基礎(chǔ)研究的進(jìn)程，除了上述工作之外，本研究同時(shí)嘗試了M.tb快速生長菌的構(gòu)建工作。本課題組成功的構(gòu)