合浦珠母貝珍珠層可溶性蛋白的提取分離及其在化妝品中的應(yīng)用.pdf

1、合浦珠母貝（Pinctada fucata）亦稱為馬氏珠母貝，廣泛分布于熱帶與亞熱帶沿海地區(qū)，是我國重要的海水養(yǎng)殖貝類。珠母貝貝殼的結(jié)構(gòu)可分為三層，從外到內(nèi)分別是角質(zhì)層、棱柱層、珍珠層。貝殼珍珠層和天然珍珠的顯微結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成基本相同，均由95％以上的文石型碳酸鈣和低于5％的有機質(zhì)組成。本論文以合浦珠母貝珍珠層粉作為研究對象，研究了珍珠層可溶性蛋白的提取與純化工藝、酪氨酸酶抑制活性及其在化妝品中的應(yīng)用，具體研究內(nèi)容如下:
　　(1

2、)以合浦珠母貝珍珠層粉為原料，采用水溶液浸提法提取珍珠層粉中的可溶性蛋白。以提取率作為衡量指標(biāo)，對提取液中NaCl的質(zhì)量濃度、提取時間、溶液pH值、提取溫度、料液比進行了單因素和響應(yīng)面優(yōu)化實驗，確定了珍珠層可溶性蛋白的最佳提取工藝參數(shù)為:以0.2％NaCl溶液為提取溶劑，料液比為1∶6，溶液pH值為9，25℃恒溫攪拌15h。采用優(yōu)化后的工藝參數(shù)提取珍珠層可溶性蛋白，其得率為74.64％。
　　(2)以蛋白粗提液為原料，采用聚乙二醇

3、(PEG)/硫酸鈉(Na2SO4)雙水相體系純化珍珠層可溶性蛋白。以蛋白回收率作為衡量指標(biāo)，對雙水相體系中的PEG平均分子量、PEG質(zhì)量分數(shù)、Na2SO4的質(zhì)量分數(shù)、離子強度、蛋白粗提液加入量進行了單因素和響應(yīng)面優(yōu)化實驗，確定了珍珠層可溶性蛋白的最佳純化工藝參數(shù)為:10 g的雙水相體系中，PEG2000、Na2SO4、KCl的質(zhì)量分數(shù)分別為30％、6％、1％，蛋白粗提液加入量為2mL。采用優(yōu)化后的工藝參數(shù)純化珍珠層可溶性蛋白，其得率為9

4、2.48％。
　　(3)研究了珍珠層可溶性蛋白對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力的抑制作用、抑制類型及抑制機理。實驗結(jié)果表明，該蛋白對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力均有良好的抑制效果，且樣品濃度與酶活力之間存在劑量依賴關(guān)系，對兩者的半抑制濃度分別為26.01 mg/mL和14.64 mg/mL。珍珠層可溶性蛋白能顯著延長酪氨酸酶單酚酶催化反應(yīng)的遲滯時間;對二酚酶的抑制類型為可逆抑制，抑制機理是競爭性抑制，米氏常數(shù)Km和抑制常數(shù)分別為0.21

5、 mg/mL和3.360 mg/mL。
　　(4)探索了珍珠層可溶性蛋白在化妝品中的應(yīng)用，利用乳化法制備出一種水包油(O/W)型膏霜類美白護膚品，并對該美白護膚霜的穩(wěn)定性、理化指標(biāo)和衛(wèi)生狀況進行了綜合評價。實驗結(jié)果表明，該護膚霜外觀穩(wěn)定均一，pH值(6.4)接近人體皮膚表面酸堿度，重金屬含量、菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)均符合標(biāo)準，證明產(chǎn)品的感官指標(biāo)、理化指標(biāo)及衛(wèi)生指標(biāo)均達到了《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)和QB/T1857