合浦珠母貝肉抗氧化肽活性和應(yīng)用研究.pdf

1、合浦珠母貝是一種養(yǎng)殖范圍最廣的珍珠貝，具有較高的經(jīng)濟(jì)和營養(yǎng)價(jià)值。本文在本實(shí)驗(yàn)室前期研究的酶法從合浦珠母貝肉中提取抗氧化肽的基礎(chǔ)上，進(jìn)行合浦珠母貝肉抗氧化肽抗衰老化妝品方面開發(fā)應(yīng)用的研究，本文以合浦珠母貝肉酶解液為原料，采用制備型葡聚糖分子凝膠色譜法、反相高效液相色譜法分離制備合浦珠母貝肉抗氧化肽組分，研究其抗氧化活性：體外抗氧化活性和小鼠體內(nèi)抗氧化活性；并運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化脂質(zhì)體的制備工藝。本研究對于將合浦珠母貝肉抗氧化肽組分的研究應(yīng)用到

2、實(shí)際生產(chǎn)當(dāng)中，促進(jìn)合浦珠母貝高值化利用提供科學(xué)依據(jù)。
　　 在制備分離合浦珠母貝肉抗氧化肽中，合浦珠母貝肉酶解液經(jīng)半制備葡聚糖G-25分離純化，得到5個(gè)組分，測定其將三價(jià)鐵離子的還原能力，并將還原能力最強(qiáng)的組分進(jìn)行葡聚糖G-15分離，測定其將三價(jià)鐵離子的還原能力，并將最強(qiáng)的組分進(jìn)行RP-HPLC分離，最后得到五種抗氧化肽。將半制備葡聚糖G-25分離純化得到的五個(gè)組分進(jìn)行三價(jià)鐵離子的還原能力、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能

3、力的測定，結(jié)果顯示，F(xiàn)’2組分的三價(jià)鐵離子的還原能力、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能力最強(qiáng)，分別為4.16、56.3％和73.2％，可作為下一步研究應(yīng)用的對象。
　　 在合浦珠母貝肉抗氧化肽活性和護(hù)膚活性的檢測中，以合浦珠母貝肉抗氧化肽原料，研究其抗氧化活性、DPPH自由基清除率、超氧陰離子清除能力、羥自由基清除能力、亞油酸過氧化反應(yīng)、紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、保濕活性及添加到化妝品中的抗氧化效果，結(jié)果表明：合浦珠母貝肉酶解液具有

4、較強(qiáng)的抗氧化能力，DPPH自由基清除率為87.7％；超氧陰離子清除率為76.3％；羥自由基清除率為83.5％；抗亞油酸過氧化能力和抑制膜脂質(zhì)過氧化能力均較強(qiáng)；具有良好的吸濕及保濕能力。合浦珠母貝酶解液在護(hù)膚霜中的最佳添加量為1％，此時(shí)DPPH自由基清除率和羥自由基清除率分別為48.34±2.96％、33.52±2.34％，具有良好的抗氧化活性和穩(wěn)定性。
　　 在合浦珠母貝肉抗氧化肽體內(nèi)試驗(yàn)中，以合浦珠母貝肉抗氧化肽為原料，用無毛

5、光老化小鼠背部涂抹的方法，研究合浦珠母貝肉抗氧化肽對小鼠光老化進(jìn)程的影響。研究小鼠背部皮膚皺紋的生成、皮膚含水量、彈性，分子生物學(xué)水平中MDA的含量、GSH-Px、CAT、羥脯氨酸的活性和組織形態(tài)學(xué)水平上的皮膚形態(tài)、基底層細(xì)胞分裂情況、角質(zhì)層同表皮厚度比例、成纖維細(xì)胞數(shù)量、膠原纖維體密度，真皮微血管體密度的測定。結(jié)果表明，合浦珠母貝肉抗氧化肽能顯著減少小鼠皮膚提拉恢復(fù)的時(shí)間，減緩皺紋的生成，顯著的降低小鼠皮膚中MDA的含量，GSH-Px

6、、CAT和羥脯氨酸的活性顯著提高，組織學(xué)觀察顯示，合浦珠母貝肉抗氧化肽對于延緩小鼠光老化進(jìn)程有顯著的作用，其中高劑量組影響最為顯著。
　　 在合浦珠母貝肉抗氧化肽脂質(zhì)體制備中，以合浦珠母貝肉抗氧化肽組分為研究對象，制備脂質(zhì)體，考察其主要影響因素。采用薄膜超聲分散法，以包封率為指標(biāo)，分別考察卵磷脂與膽酸鈉的質(zhì)量比、不同溫度、不同轉(zhuǎn)速、不同pH值、不同超聲時(shí)間等對脂質(zhì)體的影響，在此基礎(chǔ)上采用Box-Benheken設(shè)計(jì)原理采用3因素