大鼠暴發(fā)性肝衰竭動物模型腎小球Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受體(IP3RI)表達的研究.pdf

1、目的:
　　 肝腎綜合征(HRS)是重型肝炎和各種原因引起的肝硬化晚期病人一種常見并發(fā)癥，此時腎臟只有功能性改變而相對少見組織學變化。HRS病人的腎血流和腎小球濾過率(GFR)明顯下降，其標志是腎血管收縮。多種機制可能參與了腎血管收縮，其中血管平滑肌的收縮和舒張又受細胞內(nèi)Ca2+調(diào)節(jié)。當HRS發(fā)生時，患者血清中許多縮血管活性物質(zhì)(如兒茶酚胺、血管緊張素Ⅱ、血管加壓素、血栓素A2、ET、白三烯等)亦有明顯增高，這些物質(zhì)可以引起細胞

2、內(nèi)1，4，5-三磷酸肌醇(inositol1，4，5-triphosphate，IP3)合成增加，而增加的IP3必須與1，4，5-三磷酸肌醇受體(inositol1，4，5-triphosphate receptors，IP3Rs)結合介導細胞內(nèi)鈣釋放，從而引起腎血管收縮和腎小球收縮。IP3Rs中以IP3RI釋放Ca2+的能力最強。腎臟的IP3RI主要存在于腎小球系膜細胞、血管平滑肌細胞。IP3Rs蛋白的表達可受多種因素影響。但是在肝衰

3、竭動物腎小球IP3RI是否表達增加尚未明確。
　　 本研究旨在通過暴發(fā)性肝衰竭大鼠動物模型來觀察腎臟1型IP3R表達狀況。為探討肝腎綜合征發(fā)生的病理生理學機制提供實驗依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 實驗動物為SPF級別雄性SD大鼠80只，周齡10-12 wk、體重220±20 g(由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供)。制備急性肝壞死大鼠模型，根據(jù)不同的處理方法將其隨機分成4組：分為D-GalN/LPS聯(lián)合給藥組(G

4、/L組)，D-GalN單獨給藥組(G組)，LPS單獨給藥組(L組)及NS對照組。其中G/L組分為5個時間點(2h、6h、9h、12h、24h)，每個時間點取10只大鼠，其余各組均設置10只大鼠。建模成功后麻醉大鼠，剖腹剪取適量肝臟及腎臟組織，置于組織固定液中，制備石蠟標本及樹脂標本。顯微鏡觀察各組動物肝臟及腎臟組織學變化。電鏡觀察腎臟組織超微結構的改變。對各組的腎臟石蠟切片標本行免疫組化(過氧化物酶方法)，檢測Ⅰ型IP3受體蛋白。DAB

5、顯色后，有棕褐色顆粒著色的細胞為陽性細胞。
　　 結果：
　　 1.本實驗中暴發(fā)性肝衰竭組(G/L組)大鼠總死亡率達70％，肝臟HE染色可見成片的出血壞死區(qū)，內(nèi)有較多炎細胞浸潤，證明本實驗動物模型成功，可以應用。腎臟未發(fā)現(xiàn)明顯的病理學改變。
　　 2.腎臟1型IP3R免疫組織化學染色在第G、L、NS組的腎組織切片中，1型IP3R表達很弱的棕褐色信號，主要分布于腎小球系膜細胞和血管平滑肌細胞的胞漿內(nèi)。而腎小管未見陽