替米沙坦對糖尿病腎病的干預(yù)作用及其對Ⅰ 型1，4，5-三磷酸肌醇受體表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 糖尿病腎病(DKD)是糖尿病的慢性并發(fā)癥，并且是當(dāng)今終末期腎臟病的重要原因。糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。三磷酸肌醇受體(IP3R)是一種跨膜蛋白，當(dāng)三磷酸肌醇(IP3)與IP3R結(jié)合后，開放鈣通道，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣池的Ca2+釋放進(jìn)入胞漿，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)因子、效應(yīng)因子，廣泛參與細(xì)胞的生理活動。本實(shí)驗(yàn)采用鏈脲佐菌素(STZ)制造糖尿病腎病大鼠模型，并使用替米沙坦干預(yù)，旨在觀察糖尿病腎病大鼠各項(xiàng)生化指

2、標(biāo)的改變；免疫組化測定腎臟Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受體(IP3R)蛋白在腎小球系膜細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的定位、表達(dá)；RT-PCR測定IP3R mRNA水平的變化以及替米沙坦干預(yù)后的變化，探討IP3R在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 雄性SD大鼠30只隨機(jī)分為三組，即正常對照組(C，n=10)、糖尿病腎病組(D，n=10)和替米沙坦治療組(T，n=10)，動物禁食12小時(shí)，D組、T組大鼠采用鏈尿佐菌素

3、(STZ)以60mg/kg一次性單側(cè)腹腔注射制備糖尿病腎病大鼠模型，C組動物注射等量的緩沖液。穩(wěn)定3天后尾靜脈采血測定血糖，將血糖大于16.7mmol/L，為DM模型動物造模成功。普通飲食繼續(xù)喂養(yǎng)3周，用金屬代謝籠收集24小時(shí)尿液后，用磺基水楊酸法，并行空白對照測定24小時(shí)尿蛋白排泄量，當(dāng)24小時(shí)尿蛋白定量≥30mg時(shí)確認(rèn)DKD大鼠模型成功。造模后T組大鼠給予替米沙坦混懸液按40mg/kg·d一次性灌胃，C組和D組大鼠給予同等體積蒸餾水

4、灌胃，8周后收獲動物。測體重、血糖、血肌酐、血漿白蛋白、血脂；收集24小時(shí)尿標(biāo)本進(jìn)行尿蛋白定量；腎臟稱重，腎組織進(jìn)行石蠟切片、HE染色、免疫組織化學(xué)法測定Ⅰ型IP3R在腎小球系膜細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞的定位、表達(dá)；RT-PCR測定mRNA的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.糖尿病腎病大鼠動物模型成功后，C組、D組、T組大鼠的血糖分別為5.08±0.86，18.33±0.8，8.7±1.26，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<

5、0.05)；C組、D組、T組大鼠的血肌酐分別為60.13±6.55，82.50±9.63，76.63±7.59，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；C組、D組、T組大鼠的血漿白蛋白分別為38.15±1.52，23.62±0.87，31.92±0.96，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；C組、D組、T組大鼠的血清膽固醇分別為1.04±0.12，1.48±0.16，1.23±0.09，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<

6、0.05)；C組、D組、T組大鼠的血清甘油三酯分別為0.50±0.08，0.96±0.07，0.72±0.06，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；C組、D組、T組大鼠的24小時(shí)尿蛋白分別是18.06±2.25，76.50±13.26，28.72±14.35，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；C組、D組、T組大鼠的腎重指數(shù)(右腎重/體重)分別為3.26±0.47，3.78±0.28，3.62±0.33，各組比較，差

7、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　　 2.免疫組化顯示Ⅰ型IP3R主要分布于腎小球系膜細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的胞漿內(nèi)。在大鼠腎組織切片中，C組大鼠Ⅰ型IP3R免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞百分比為24％±3％，D組大鼠Ⅰ型IP3R免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞增加(陽性細(xì)胞百分比為65％±5％)，T組大鼠Ⅰ型IP3R免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞降低(陽性細(xì)胞百分比為43％±4％)，各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
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8、.RT-PCR結(jié)果示C組大鼠Ⅰ型IP3R mRNA的灰度比為0.38±0.03，D組大鼠Ⅰ型IP3R mRNA的灰度比為0.75±0.08，T組大鼠Ⅰ型IP3R mRNA的灰度比為0.61±0.05，各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受體主要分布于腎臟腎小球系膜細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的胞漿內(nèi)。2.在糖尿病腎病發(fā)病過程中，腎臟Ⅰ型1，4，5-三磷酸肌醇受體表達(dá)增