不同時間電針對急性腦出血大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)影響的研究.pdf

1、目的：腦出血以其高死亡率，高致殘率嚴重危害著人類的身體健康，隨著全球，尤其是我國社會人口老齡現(xiàn)象的日趨嚴重，出血性腦卒中的防治研究已迫在眉睫。改善微循環(huán)、增加血流量，減輕腦組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)，是治療腦出血的有效手段之一．針灸治療因其具有安全、有效、簡便、經(jīng)濟、無不良反應(yīng)等優(yōu)點，已被應(yīng)用于腦出血的治療中。但是關(guān)于針刺治療腦出血的時機卻一直頗有爭議，成為困擾臨床治療的一個難題。因此本實驗以膠原酶Ⅶ誘導(dǎo)大鼠尾殼核腦出血為模型，從腦內(nèi)氧化應(yīng)激反

2、應(yīng)角度研究不同時間點電針對腦組織HO-1和HO-2表達的影響，探討針刺治療腦出血的時效性，為臨床針刺治療腦出血提供可靠的實驗依據(jù)。 方法：選擇健康wistar雄性大鼠56只，體重在200-250g。按體重編號，代入隨機數(shù)字表分為正常組、模型組、3h電針組和72h電針組，模型組又分為模型1組、模型2組、模型3組、模型4組；每組8只。模型1組和模型2組分別為造模后3h、72h時即刻處死取材，模型3組和模型4組分別為造模3h、72h后

3、+5d處死取材。造模采用0.5u膠原酶Ⅶ注射大鼠尾殼核(前囟后1mm，正中矢狀縫向右4mm，深5mm)誘導(dǎo)大鼠腦出血的方法，造模后所有動物均在江漢大學(xué)動物房飼養(yǎng)。 3h電針組和72h電針組電針腦出血大鼠穴取水溝穴、內(nèi)關(guān)穴(雙側(cè))、三陰交穴(雙側(cè))。分別于造模后3h、72h時開始針刺，水溝和右側(cè)大鼠耳朵接一對電極，同側(cè)內(nèi)關(guān)和三陰交接一對電極，連續(xù)波，頻率120次/min，強度1mA，每次留針30min，每日針刺一次，針刺5次．

4、 以上七組大鼠均用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，開胸經(jīng)升主動脈依次灌入生理鹽水100ml、4℃預(yù)冷的含4％多聚甲醛的0.01mol／L磷酸緩沖液(PBS，pH7.4)400ml。灌畢取腦，置于4％多聚甲醛溶液過夜后固定。以注射點為中心冠狀石蠟切片，片厚5μm，切10片。HE染色，采用免疫組化法檢測血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1)和血紅素氧合酶-2(Heme Oxygenase-2)，在400倍高倍鏡下隨機取血腫周圍

5、4個不重疊視野，計數(shù)HO-1和HO-2陽性細胞數(shù)，統(tǒng)計分析。 結(jié)果： (1)HE染色結(jié)果：正常組腦組織未見明顯異常改變；模型1組腦組織內(nèi)見大量腦出血，神經(jīng)纖維纏結(jié)、斷裂，腦組織內(nèi)未見明顯小膠質(zhì)細胞浸潤；模型2組內(nèi)見少量出血，少許小膠質(zhì)細胞浸潤(少許細胞內(nèi)出現(xiàn)泡沫)及大量液化性壞死(篩狀軟壞灶)；模型3組腦組織內(nèi)可見大量小膠質(zhì)細胞浸潤、壞死伴少量出血；模型4組腦組織內(nèi)可見液化灶縮小及大量小膠質(zhì)細胞浸潤；3h電針組腦組織內(nèi)可

6、見泡沫細胞浸潤及出血；72h電針組腦組織內(nèi)可見壞死灶明顯縮小、小膠質(zhì)細胞浸潤、極少量出血。 (2)免疫組化結(jié)果： ①各組腦組織HO-1的表達模型組HO-1較正常組均升高(P<0.01)，有非常顯著性差異；模型3組比模型1組高(P<(0.01)，有非常顯著性差異；模型4組較模型2組高(P<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組較模型3組低，有非常顯著性差異(p<0.01)；72h電針組較模型4組低(p<0.05)，有顯著

7、性差異；3h電針組較模型1組高(p<0.01)，有非常顯著性差異；72h電針組較模型2組高(p<0.01)，有非常顯著性差異；72h電針組較3h電針組高(P<0.01)，有非常顯著性差異。 ②各組腦組織HO-2的表達與正常組比較模型1組、模型2組、模型3組梗死灶內(nèi)未見HO-2陽性神經(jīng)元；模型4組始有表達，較模型2組高(p<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組較模型1組高(p<0.01)，有非常顯著性差異(p<0.01)；72

8、h電針組較模型2組高(p<0.01)，有非常顯著性差異(p<0.01)；3h電針組較模型3組高(p<0.01)，有非常顯著性差異(p<0.01.)；72h電針組較模型4組低(p<0.01)，有非常顯著性差異；72h電針組較3h電針組高(P(0.01)，有非常顯著性差異。 結(jié)論： (1)氧化應(yīng)激反應(yīng)參與了腦出血后腦水腫和神經(jīng)元的損傷，可能是腦出血損傷的一個重要因素之一。 (2)電針可以提高腦出血后腦內(nèi)HO-1和HO