基于DNA條形碼的分子生物學(xué)方法對未知小鯢進行物種鑒定.pdf

1、物種鑒定是是判斷生物親緣關(guān)系的重要手段。在保護生物多樣性和維持全球生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定發(fā)展的過程中，需要正確認(rèn)識和區(qū)分物種，特別是那些珍稀瀕危以及具有經(jīng)濟意義的重要物種，因此準(zhǔn)確的分類鑒定工作顯得尤為重要。
　　2013年1月，在衡陽市岣嶁峰的王馬凼發(fā)現(xiàn)了未知的兩棲動物，經(jīng)外形的可數(shù)性狀特征與可量性狀特征的比較鑒定，初步判斷為兩棲綱Amphibia有尾目Urodela小鯢科Hynobiidae小鯢屬Hynobius的物種。對于兩棲動物的物

2、種鑒定，除借助外形特征外，還需要對內(nèi)部結(jié)構(gòu)進行全面的解剖，甚至利用生物化學(xué)的手段，從分子水平進于DNA鑒定，才能準(zhǔn)確的判斷一個物種的分類地位。經(jīng)歷史資料查閱獲悉，小鯢科在湖南省區(qū)域內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)2種，即分布于張家界市桑植縣八大公山國家級保護區(qū)黃斑擬小鯢Pseudohynobiusflavomaculatus和分布于永州市祁陽縣祁陽省級自然保護區(qū)的掛榜山小鯢H.guabangshanensis，岣嶁峰不曾記錄有小鯢分布。從地理區(qū)域上判斷，祁陽的

3、掛榜山與衡陽的岣嶁峰屬于同一山系，岣嶁峰發(fā)現(xiàn)的物種極有可能與掛榜山小鯢有關(guān)系。對于該物種的判斷，不僅僅關(guān)系到它的身份確定，還涉及該物種的地理分布和進化規(guī)律。鑒于此，我們除進行了傳統(tǒng)的形態(tài)特征比對外，還作了野外實地調(diào)查，對其生活習(xí)性、環(huán)境生態(tài)以及周邊人為活動做了系統(tǒng)調(diào)查。另外，還利用線粒體DNACOⅠ基因序列保守性的特征，利用TaKaRa公司的試劑盒對所采組織進行了總DNA的提取，然后設(shè)計了特殊的引物，利用PCR技術(shù)對提取的DNA進行了擴

4、增，最后經(jīng)南京金斯瑞生物科技有限公司的測序，獲得了岣嶁峰小鯢的COⅠ590bp基因序列片段。從而弄清了該小鯢的真正分類歸屬，以及該小鯢在岣嶁峰的分布情況、種群數(shù)量等，為該物種的分類地位的確定和保護提供了科學(xué)的依據(jù)。
　　本研究結(jié)果與結(jié)論如下:
　　1.通過形態(tài)學(xué)、生態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法相結(jié)合，最終確定發(fā)現(xiàn)于衡陽岣嶁峰的小鯢為掛榜山小鯢H.guabangshanensis。
　　2.實地調(diào)查結(jié)果顯示，掛榜山小鯢在岣嶁峰僅