基于DNA條形碼技術(shù)的魚(yú)翅物種鑒別研究.pdf

1、魚(yú)翅是我國(guó)傳統(tǒng)“海八珍”之一,屬于高值水產(chǎn)加工品,伴隨我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,魚(yú)翅消費(fèi)量逐年增大,魚(yú)翅市場(chǎng)上也因此浮現(xiàn)出諸多亂象。某些商販將明膠等材料或者鰩類(lèi)魚(yú)翅標(biāo)注為鯊魚(yú)魚(yú)翅進(jìn)行販賣(mài)干擾魚(yú)翅貿(mào)易的正常進(jìn)行,而不法分子捕撈瀕危物種進(jìn)行割取魚(yú)翅不僅對(duì)魚(yú)翅貿(mào)易造成了較大阻礙,也人為加重了某些鯊類(lèi)的瀕危程度。為了規(guī)范魚(yú)翅市場(chǎng),打擊瀕危物種的貿(mào)易并避免欺騙消費(fèi)者現(xiàn)象的發(fā)生,鑒于此,進(jìn)行魚(yú)翅物種鑒別具有重要意義。傳統(tǒng)的魚(yú)翅鑒別主要通過(guò)感官鑒定法開(kāi)展,感官

2、鑒定法能夠提供一定的魚(yú)翅商品名分類(lèi)信息,但無(wú)法提供準(zhǔn)確的魚(yú)翅物種來(lái)源信息。鑒于DNA條形碼在水產(chǎn)品物種鑒定中運(yùn)用廣泛,準(zhǔn)確性高等原因,本文基于DNA條形碼方法進(jìn)行魚(yú)翅物種鑒別的相關(guān)研究。
　　魚(yú)翅為鯊魚(yú)魚(yú)鰭中的角質(zhì)鰭條,屬于致密結(jié)締組織,細(xì)胞含量不豐富。本文中研究的魚(yú)翅樣品為市場(chǎng)上最為常見(jiàn)的明翅,即一種半加工形態(tài)魚(yú)翅制品。此類(lèi)魚(yú)翅是經(jīng)由鯊魚(yú)魚(yú)鰭通過(guò)褪沙(去皮),去除殘肉與軟骨,漂白曬干等加工步驟得到的。上述原因造成了魚(yú)翅DNA提取

3、的困難。為了獲取能夠滿(mǎn)足條形碼鑒定所需的DNA,本文針對(duì)魚(yú)翅特性采用了發(fā)制-凍干的前處理方法進(jìn)行魚(yú)翅組織破碎,選取了Chelex-100螯合樹(shù)脂法,STE法,經(jīng)典CTAB法以及試劑盒純化法用于魚(yú)翅DNA提取效果的比較以選取最佳方法。根據(jù)比較結(jié)果,針對(duì)CTAB提取方法中的進(jìn)行了多個(gè)步驟的優(yōu)化與改進(jìn),提出了改良CTAB法用于魚(yú)翅DNA提取。根據(jù)DNA濃度值/純度值以及PCR擴(kuò)增成功率,改良CTAB法能夠獲得較好的魚(yú)翅DNA提取效果。

4、　　為了準(zhǔn)確進(jìn)行國(guó)內(nèi)水產(chǎn)市場(chǎng)中魚(yú)翅制品的物種來(lái)源調(diào)查,本文選取了我國(guó)北方魚(yú)翅貿(mào)易中心城市青島及占全國(guó)魚(yú)翅貿(mào)易總量90％以上的廣東省分別進(jìn)行采樣。本文針對(duì)共計(jì)例107魚(yú)翅樣品進(jìn)行了DNA條形碼鑒別研究。除了選取COⅠ(cytochrome oxidase subunitⅠ)外,還著重考慮了使用16SrRNA編碼基因進(jìn)行魚(yú)翅鑒別的可行性與準(zhǔn)確性。針對(duì)魚(yú)翅樣品的物種鑒定結(jié)果顯示:魚(yú)翅的物種來(lái)源較豐富,涵蓋不同鯊類(lèi)10種,如尖吻鯖鯊,路氏雙髻鯊

5、,鐮狀真鯊,大青鯊等;基于16SrRNA序列的鑒定結(jié)果與基于 COⅠ序列的鑒定結(jié)果一致。多數(shù)樣本與已知物種的現(xiàn)有序列之間能夠在聚類(lèi)關(guān)系中形成單系,其中來(lái)源于灰鯖鯊屬尖吻鯖鯊的魚(yú)翅樣品的存在兩類(lèi)聚類(lèi)關(guān)系,基于兩基因的聚類(lèi)關(guān)系一致。而針對(duì)真鯊屬不同種的鑒定結(jié)果顯示,16SrRNA未能鑒別出來(lái)源于杜氏真鯊與蒂氏真鯊的魚(yú)翅樣本,進(jìn)一步分析顯示,這是由于NCBI中相關(guān)序列(全基因組及16S相關(guān)基因)的缺少所造成的,同時(shí)也表明基于16SrRNA在進(jìn)

6、行真鯊屬不同鯊魚(yú)物種鑒別水平上的準(zhǔn)確性?？梢缘贸鼋Y(jié)論,16SrRNA基因適用于常見(jiàn)魚(yú)翅的物種來(lái)源鑒定。
　　本文針對(duì)鯊魚(yú)物種進(jìn)行分析顯示,存在兩類(lèi)雙髻鯊類(lèi)(路氏雙髻鯊與錘頭雙髻鯊)為華盛頓公約附錄Ⅱ中禁止國(guó)際貿(mào)易的物種,所占比例達(dá)到所檢魚(yú)翅的14.01%,上述兩類(lèi)鯊魚(yú)及其相關(guān)制品屬于我國(guó)二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物,其相關(guān)貿(mào)易違反了我國(guó)現(xiàn)有法律條例。此外,所檢魚(yú)翅樣品存在大眼長(zhǎng)尾鯊、尖吻鯖鯊等根據(jù)紅色名單劃分屬于“易危”類(lèi)別,雖然我國(guó)現(xiàn)目前并