Saxthrombin純化和初步晶體學(xué)研究以及SPF31的構(gòu)建和純化.pdf

1、1．巖棲蝮蛇類凝血酶純化以及初步晶體學(xué)研究： 蛇毒是由蛇的毒腺分泌的一種天然蛋白質(zhì)，含有多種蛋白質(zhì)、多肽、酶類和其他小分子物質(zhì)，具有廣泛的生物學(xué)活性。蛇毒能夠以多種方式影響血液凝集和血小板功能。其中的類凝血酶作為蛇毒中的一種絲氨酸蛋白酶，在血液凝集中起關(guān)鍵性的作用。但與凝血酶不同，類凝血酶只作用水解血纖蛋白原鏈A或者鏈B的其中一個(gè)，而且不能激活體內(nèi)凝血因子ⅩⅢ，因此不形成交聯(lián)的血凝塊，形成的非交聯(lián)纖維蛋白能立即被纖維蛋白溶解酶徹

2、底降解，從而使體內(nèi)纖維蛋白原降低，這些特點(diǎn)使得該酶在治療血栓類疾病上具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 巖棲蝮蛇(Gloydius saxatilis)是中國北方毒性最強(qiáng)的蝮蛇之一，我們使用DEAE，Phenyl和CM液相色譜，從巖棲蝮蛇中分離純化了類凝血酶Saxthrombin。SDS-Page測(cè)量蛋白的分子量在30kD左右，通過懸滴液相擴(kuò)散方法，我們獲得了高質(zhì)量的Saxthrombin晶體。晶體衍射分辨率可達(dá)到1.43A。已經(jīng)完成了晶體衍

3、射數(shù)據(jù)的收集，晶體空間群為C2，晶胞參數(shù)為a=97.234 A，9=52.208 A，c=50.103A，β=96.724°。根據(jù)Saxthrombin的分子量和晶胞體積估算Matthews coefficient為2.13A<'-3> Da<'-1>，容劑含量為42.4％，一個(gè)不對(duì)稱單位里面只有含有一個(gè)蛋白質(zhì)分子。高分辨率晶體衍射數(shù)據(jù)的收集為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)解析和結(jié)構(gòu)功能關(guān)系研究奠定了基礎(chǔ)。 2．SPF31 的表達(dá)、純化：

4、 熱休克蛋白(Hsp)是一類分布廣泛的進(jìn)化上非常保守的蛋白家族。在細(xì)胞熱休克或者其他應(yīng)激情況下，熱休克蛋白對(duì)于細(xì)胞的生存是必須的。熱休克蛋白參與廣泛的功能，包括調(diào)節(jié)蛋白折疊和降解、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和大分子蛋白組裝。 而其中的DnaJ/Hsp40蛋白最初發(fā)現(xiàn)于大腸埃希氏桿菌，在真核生物中稱為Hsp40，是DnaK/Hsp70亞類的輔助因子，是在調(diào)節(jié)其分子伴侶Hsp70蛋白的活性上有極其重要的作用。目前普遍認(rèn)為Hsp70蛋白的分子伴侶活性由