去甲腎上腺素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞SP、CGRP的表達(dá)、心肌細(xì)胞凋亡及SP對心肌細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的:觀察去甲腎上腺素(norepinepherine,NE)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)表達(dá)、心肌細(xì)胞凋亡，以及SP對心肌細(xì)胞凋亡的影響。 方法:(1)第一部分實(shí)驗(yàn)選用1～3天齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法對心肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定：選用8孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細(xì)胞隨機(jī)分為2組，每組4孔：1組為陰性對照組；2組為實(shí)驗(yàn)組。

2、 (2)第二部分實(shí)驗(yàn)選用20孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細(xì)胞隨機(jī)分為5組，每組4孔：1組為對照組；2組為1h實(shí)驗(yàn)組；3組為3h實(shí)驗(yàn)組；4組為6h實(shí)驗(yàn)組；5組為12h實(shí)驗(yàn)組。2～5組所施加的NE終濃度均為10<'-8> mol/L。細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)分別加入NE共培后，取樣本進(jìn)行測定。采用免疫細(xì)胞化學(xué)(IC)染色方法觀察NE誘導(dǎo)后心肌細(xì)胞內(nèi)SP、CGRP表達(dá)水平的變化。 (3)第三部分實(shí)驗(yàn)選用16孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細(xì)胞隨

3、機(jī)分為4組，每組4孔：1組為對照組；2組為1h實(shí)驗(yàn)組；3組為3h實(shí)驗(yàn)組；4組為6h實(shí)驗(yàn)組。2～4組所施加的NE終濃度均為10<'-8>mol/L。細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)分別加入NE共培后，取樣本進(jìn)行測定。用tunel法觀察NE誘導(dǎo)后心肌細(xì)胞的捌亡。 (4)第四部分實(shí)驗(yàn)選用12孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細(xì)胞隨機(jī)分為3組，每組4孔：1組為對照組；2組為NE實(shí)驗(yàn)組；3組為SP+NE組。2、3組NE的終濃度為10<'-8>mol/L，3組SP

4、終濃度為10<'-8>mol/L，與NE同時加入細(xì)胞培養(yǎng)基共培1小時后，取樣本進(jìn)行測定。采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測，觀察SP對NE誘導(dǎo)后心肌細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果:(1)培養(yǎng)細(xì)胞上清液中加入去甲腎上腺素(NE)進(jìn)行誘導(dǎo)，1小時、3小時、6小時、12小時組NE均可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞SP、CGRP表達(dá)水平較對照組顯著升高(p<0.05)，在10<'-8>mol/L、6小時達(dá)高峰。 (2)培養(yǎng)細(xì)胞上清液中加入NE(10<'-8>mol/

5、L)， 1小時、3小時、6小時均可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，較對照組顯著(p<0.05)，在1小時最為明顯。 (3)SP+NE組凋亡率明顯低于NE10<'-8>mol/L、1小時組(p<0.05)。 結(jié)論:(1)培養(yǎng)細(xì)胞上清中加入去甲腎上腺素可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞SP、CGRP表達(dá)水平的增高。 (2)培養(yǎng)細(xì)胞上清中加入去甲腎上腺素可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。 (3)SP預(yù)先干預(yù)可顯著抑制去甲腎上腺素誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞