內(nèi)脂素誘導(dǎo)心肌細胞肥大的研究.pdf

1、目的：心肌肥厚是心臟對各種刺激產(chǎn)生的一種緩慢，但是卻較為有效的自適應(yīng)性過程。心肌肥厚的改變是指心肌細胞的肥大，成纖維細胞的分化增殖，細胞外基質(zhì)沉積和心肌壁內(nèi)小血管的重構(gòu)。其早期改變表現(xiàn)為代償性的肥大，能夠在短期內(nèi)增強心肌的泵血功能，使心臟得以維持正常的有效循環(huán)血量和相當?shù)膬淠芰?，此過程又被稱為心肌重塑。但這種壓力刺激若長期得不到改善，則會導(dǎo)致心肌的失代償性肥厚，誘發(fā)心臟舒張及收縮功能降低，最終導(dǎo)致心臟功能不全，增加心律失常、心力衰竭、

2、甚至是猝死的風險[1]。
　　腦鈉肽是日本學者Sudoh等[2]從豬腦中分離出來一種多肽類神經(jīng)激素，又稱為B型利鈉肽(B-type Natriuretic Peptide，BNP)。在血容量急劇增加使心室壁張力發(fā)生改變和心室壓力超負荷的情況下，反應(yīng)性地由心室肌細胞合成與分泌，具有利鈉、利尿、舒張血管、拮抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)(SNS)活性等作用。BNP還能用于心血管系統(tǒng)疾病的診斷，心臟功能的評

3、估以及對心源性呼吸困難和非心源性呼吸困難的鑒別。BNP在循環(huán)血液中的水平還可以作為對心力衰竭治療效果的重要反映。已有研究證實在心肌肥厚過程中，血漿BNP的水平也會相應(yīng)的隨之增加。因此BNP含量在一定程度上能作為反映心肌細胞的肥大程度的指標。
　　現(xiàn)代病理生理學研究表明神經(jīng)內(nèi)分泌-細胞因子系統(tǒng)長期慢性的激活狀態(tài)能顯著促進心肌重塑過程的發(fā)生發(fā)展，在心血管系統(tǒng)疾病的進展中具有重要作用。近年來的研究表明脂肪組織是一個活躍的內(nèi)分泌器官，能夠

4、分泌多種生物活性物質(zhì)，統(tǒng)稱為脂肪細胞因子[3，4]。這些脂肪細胞因子包括細胞因子，如腫瘤壞死因子(TNF)-α和白介素(IL)-6；趨化因子，如單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)和IL-8；激素，如瘦素(leptin)、內(nèi)脂素(visfatin)、脂聯(lián)素(adiponectin)和抵抗素(resistin)[5，6]。其中，內(nèi)脂素是2005年，由Fukuhara等[7]發(fā)現(xiàn)的

5、一種與前B細胞集落增強因子(pre-B cell colony-enhancing factor，PBEF)的5’端非編碼區(qū)序列相同的cDNA片段，由于此cDNA片段在人和鼠的腹部內(nèi)臟脂肪組織中高度表達，故將其命名為內(nèi)脂素。Visfatin具有類胰島素和降低血糖以及改善外周組織胰島素抵抗的作用。此外還參與多種病理過程，如炎癥反應(yīng)、心肌纖維組織增生、內(nèi)皮功能紊亂、血管損傷等。而內(nèi)脂素對心肌細胞會產(chǎn)生何種影響，是否會引起心肌細胞的肥大尚無相

6、關(guān)報道。本實驗旨在通過觀察不同濃度重組大鼠內(nèi)脂素，以及相同濃度重組大鼠內(nèi)脂素在不同作用時間下刺激體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞，對心肌細胞表面積，心肌細胞BNP-mRNA以及培養(yǎng)液中BNP水平的影響，探討內(nèi)脂素是否會引起心肌細胞肥大，為心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)病機制添加新的思路，為心血管研究領(lǐng)域提供新的靶點。
　　方法：無菌試驗條件下不分性別取新生2-3天Sprague-Dawley大鼠心肌細胞進行原代培養(yǎng)，48小時含血清培養(yǎng)，24小時撤血

7、清培養(yǎng)后，選取生長狀態(tài)好的細胞隨機分為九組：不同濃度重組大鼠內(nèi)脂素四組：①對照組、②重組大鼠內(nèi)脂素10ng/mL組、③重組大鼠內(nèi)脂素50ng/mL組、④重組大鼠內(nèi)脂素100ng/mL組；不同作用時間五組：①對照組、②12小時組、③24小時組、④48小時組、⑤72小時組。以不同濃度的重組大鼠內(nèi)脂素干預(yù)24小時，及重組大鼠內(nèi)脂素(100ng/mL)作用不同時間后，用圖象分析軟件測量心肌細胞的表面積，并應(yīng)用Real time-PCR和Elis

8、a技術(shù)檢測各組心肌細胞BNP-mRNA的表達及培養(yǎng)液中BNP的含量。
　　結(jié)果：
　　1隨著內(nèi)脂素濃度的增加，大鼠心肌細胞表面積、心肌細胞BNP-mRNA表達和培養(yǎng)液中BNP水平隨之增大，并且在濃度為100ng/mL時達到峰值，各組間均數(shù)兩兩比較均顯示有顯著差異(P＜0.05)。
　　2心肌細胞在內(nèi)脂素(100ng/mL)作用48小時內(nèi)，大鼠心肌細胞表面積、心肌細胞BNP-mRNA表達和培養(yǎng)液中BNP水平隨作用時間的延