預襯修飾脫鈣骨組織研究.pdf

1、目的： 采用去細胞加預襯修飾的方法來處理牛脫鈣骨，從而來了解其作為組織工程材料細胞黏附特性的變化。 方法： (1) 從黃牛長骨兩端取出新鮮的松質骨，按照煙臺正海生物技術有限公司、中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所制備脫鈣骨的方法進行處理(申請?zhí)?專利號：200610080609)，從而得到實驗中所需的牛脫鈣骨。 (2) 將牛脫鈣骨片截取成合適大小，采用多步驟去垢劑-酶消化法和光氧化交聯予以去細胞化處理；以纖

2、維連接蛋白(Fibronectin，Fn)預襯為試驗組，而磷酸緩沖液體組(PBS)預襯為對照組，采用物理包裹法(每組成分均以30μl的劑量)對脫鈣骨進行預襯處理，共預襯處理去細胞化脫鈣骨片18片(裁剪每片面積約1 cm2)。 (3) 每片種植骨髓間充質干細胞株細胞5×105，靜態(tài)培養(yǎng)7天，取1，4，7天標本表面細胞記數，標本切片HE染色，掃描電鏡和透射電鏡檢測，比較各處理組骨片表面細胞黏附數目、結合程度，來了解預處理方法對增強細

3、胞黏附性和促進細胞生長的影響。 結果： (1) 細胞記數：細胞培養(yǎng)7天，預襯組細胞數目明顯多于對照組(p<0.05)。 (2) 標本石蠟包埋后切片HE染色結果：第1天各組表面細胞排列密集，紊亂，細胞核有堆積，部分呈雙層排布；第4天，對照組骨片表面細胞疏松，有成片分布；預襯組細胞連接成片，呈單層排布。第7天，預襯組細胞細胞鋪連成片，與下方纖維結構有連接，未出現表皮脫落。 (3) 取7天標本掃描電鏡顯示：對照