可注射脫鈣骨基質(zhì)(DBM)修復(fù)兔橈骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究脫鈣骨基質(zhì)(demiileralized bone matrix,DBM)混合醫(yī)用幾丁糖(medical chitogan)制備成可注射骨修復(fù)材料(injectable boneregeneration composite,IBRC)修復(fù)骨缺損的效果,并與凍干骨修復(fù)效果比較,為同種異體骨材料新劑型的研究和臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴可注射脫鈣骨基質(zhì)(DBM)及凍干骨的制備:選用14只新西蘭大白兔處死

2、后,取雙側(cè)尺橈骨干皮質(zhì)骨塊制備DBM,取雙側(cè)股骨髁部松質(zhì)骨決制備凍干骨。可注射脫鈣骨基質(zhì)制備:尺橈骨皮質(zhì)骨塊依次經(jīng)深低溫冷凍(-80℃),切割粉碎成顆粒狀,乙醚脫脂,鹽酸脫鈣24h,冷凍干燥,輻照滅菌制備成脫鈣骨基質(zhì)顆粒。脫鈣骨基質(zhì)與濃度20mg/ml醫(yī)用幾丁糖凝膠依據(jù)體積比5:2充分混合后,分裝成0.7ml可注射脫鈣骨基質(zhì)(即舍0.5ml脫鈣骨基質(zhì)和0.2ml的醫(yī)用幾丁糖凝膠),4℃冰箱存放,備用。凍干骨制備:股骨髁部松質(zhì)骨依次經(jīng)深低

3、溫冷凍(-80℃),切割粉碎成顆粒狀,乙醚脫脂,冷凍干燥,輻照滅菌,4℃冰箱存放,備用。⑵可注射脫鈣骨基質(zhì)(DBM)修復(fù)骨缺損的效果研究:將60只新西蘭大白兔,隨機(jī)抽取54只分別編入A組(DBM組),B組(可注射DBM組)、C組(凍干骨組),各18只；余下6只為D組(空白對(duì)照組)。將新西蘭大白兔的左側(cè)橈骨中1/3連同骨膜切除1.5cm長(zhǎng)的骨塊,做成標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型,A組植入DBM顆粒(0.5ml),B組植入可注射DBM(0.5mlDBM+

4、0.2ml醫(yī)用幾丁糖),C組植入凍干骨顆粒(0.5ml),D組不植入任何骨材料。在術(shù)后2周、4周、8周、12周,各組均行X線攝片；術(shù)后4周、8周、12周,A、B、C每組各時(shí)間點(diǎn)取6只兔子通過(guò)大體觀察、HE染色及改良麗春紅三色染色病理組織學(xué)檢查、熒光雙標(biāo)測(cè)量,以及Micro-CT測(cè)量來(lái)觀察、評(píng)價(jià)骨愈合的程度,分析各組之間骨愈合有無(wú)差異。
　　 結(jié)果：①肉眼觀察Hiteheock粘連程度分級(jí):術(shù)后各組在相同時(shí)間點(diǎn)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P>0.05),但各組在不同時(shí)間點(diǎn)的組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②X線攝片檢查:依據(jù)Lane—Sandhu X線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)骨修復(fù)情況。2周時(shí)A、B、C組間無(wú)顯著差異(P>0.05),但A、B、C組與D組均有顯著差異(P<0.05)；4周、8周、12周時(shí)A組與B組無(wú)顯著差異(P>0.05),A組與C組、B組與C組和A、B、C組分別與D組比較均有顯著差異(P<0.05)。③組織學(xué)觀察：HE染色組織學(xué)觀察:觀察骨小梁、纖

6、維結(jié)締組織和類骨組織的生成量以及成骨細(xì)胞,并用Lane—sandhu法組織學(xué)評(píng)價(jià)。4周時(shí)A組優(yōu)于B組和C組,且B組優(yōu)于C組,組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。8周、12周時(shí)A組與B組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組優(yōu)于C組,B組優(yōu)于C組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。改良麗春紅三色組織學(xué)觀察:4周、8周、12周時(shí),新生骨組織的生長(zhǎng)活躍程度均為A組與B組近似,A組和B組優(yōu)于C組。④熒光雙標(biāo)測(cè)量結(jié)果:4周、

7、8周、12周時(shí),A組與B組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組與C組以及B組與c組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5、Micro-CT測(cè)量結(jié)果:定量計(jì)算新生骨的體積,4周、8周、12周時(shí),A組與B組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組與C組以及B組與c組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：⑴制備的可注射脫鈣骨基質(zhì)具有良好的修復(fù)骨缺損效果,其效果與脫鈣骨基質(zhì)顆粒修復(fù)骨缺損相當(dāng)。⑵制備的可注射脫鈣骨