1，25-二羥維生素D-,3-對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥和肺內(nèi)及巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的影響.pdf

1、支氣管哮喘(下稱(chēng)哮喘)是一種常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，全球發(fā)病率逐年增高，慢性氣道炎癥哮喘主要特征，表現(xiàn)為間歇的氣道阻力增加，氣道炎癥和粘液高分泌。而呼出氣中體中一氧化氮的高含量也被認(rèn)為是哮喘的一個(gè)特征，NO的增加與氣道的炎性反應(yīng)、誘導(dǎo)痰中的嗜酸細(xì)胞及氣道阻力是成正相關(guān)。深入探討氣道炎癥的機(jī)制對(duì)于發(fā)現(xiàn)新的、有效的哮喘治療方法具有重要意義。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，1,25-二羥維生素D3(1，25(OH)2D3)參與多種疾病的炎癥過(guò)程，具有廣泛的抗炎

2、作用。但對(duì)1，25(OH)2D3在哮喘氣道炎癥中的作用尚缺乏統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。本課題從體內(nèi)、體外兩方面，研究1，25(OH)2D3參與哮喘氣道炎癥作用和機(jī)制。 第一部分：1,2s-二羥維生素D3對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥和肺內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶影響 第一節(jié)：哮喘大鼠模型的建立和1，25-二羥維生素D3對(duì)氣道炎癥的影響 目的：本節(jié)探討1,25-二羥維生素D3對(duì)于大鼠哮喘氣道炎癥和肺功能的影響。 方法：50只Wistar大

3、鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組，哮喘組，預(yù)防處理組和治療組。用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，第一組預(yù)防處理組在致敏前三天給予口服羅蓋全(2.5μg/kgperday)，共給藥3周，第二組預(yù)防組則于致敏第一、七天給予肌注vitaminD3(500000U/kg)。治療組則于激發(fā)開(kāi)始前給藥處理。應(yīng)用動(dòng)物肺功能儀測(cè)定大鼠對(duì)于乙酰膽堿刺激的氣道反應(yīng)性，測(cè)定支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和IL-4表達(dá)水平及肺組織病理變化。檢測(cè)肺組織

4、中一氧化氮(NO)含量。 結(jié)果：1,25(OH)2D3預(yù)防及治療組可減輕BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，同時(shí)降低肺組織中NO量，改善哮喘肺功能。 結(jié)論：以上結(jié)果提示哮喘大鼠給予1,25(OH)2D3可降低哮喘氣道炎癥。 第二節(jié)：1,25-二羥維生素D3對(duì)大鼠哮喘模型iNOs的影響 目的：探討1,25-二羥維生素D3對(duì)大鼠哮喘模型iNOs的影響。 方法：50只Wistar大鼠隨機(jī)分為四組，處理

5、及給藥同第一節(jié)。檢測(cè)肺組織中一氧化氮合酶活性(iNOS)和各組iNOSmRNA表達(dá)水平，用免疫組化染色方法檢測(cè)肺組織iNOS的表達(dá)并觀察iNOS在氣道組織分布的改變，檢測(cè)各組間iNOS蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：1，25(OH)2D3預(yù)防及治療組可降低肺組織iNOS活性，1,25(OH)2D3預(yù)防及治療組可降低哮喘大鼠肺組織中iNOSmRNA的表達(dá)水平，同時(shí)免疫組化結(jié)果顯示，干預(yù)組可降低哮喘大鼠氣道組織中上皮細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞中iNOS

6、陽(yáng)性。蛋白檢測(cè)提示干預(yù)組可降低哮喘大鼠氣道組織中iNOS蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3可降低iNOS表達(dá)水平，提示1,25(OH)2D3對(duì)于哮喘可能有潛在的治療作用。 第二部分：1,25-二羥維生素D3對(duì)于體外哮喘大鼠巨噬細(xì)胞的影響和作用機(jī)制 第一節(jié)：1,25-二羥維生素D3在體外對(duì)于大鼠巨噬細(xì)胞的影響 目的：探討1,25.二羥維生素D3在體外對(duì)于大鼠巨噬細(xì)胞的影響。 方法

7、：用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，分離大鼠肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞，體外培養(yǎng)，給予10-13～10-8mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IL-4水平，同時(shí)檢測(cè)上清中NO含量和iNOS活力，免疫組化檢測(cè)巨噬細(xì)胞iNOS表達(dá)情況。 結(jié)果：1，25(OH)2D3干預(yù)組可降低IL-4水平，降低培養(yǎng)上清iNOS活性和NO含量，同時(shí)免疫組化結(jié)果顯示，干預(yù)組可降低哮喘大鼠巨嗜細(xì)胞中iNOS陽(yáng)性表達(dá)。 結(jié)

8、論：1,25(OH)2D3體外干預(yù)培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可降低NO及IL-4水平。 第二節(jié)：1,25-二羥維生素D3對(duì)于體外哮喘大鼠巨噬細(xì)胞的影響和作用機(jī)制 目的：探討1,25.二羥維生素D3對(duì)于體外哮喘大鼠巨噬細(xì)胞iNOS的影響和作用機(jī)制。 方法：用卵白蛋白作為致敏原制備哮喘大鼠模型，分離大鼠肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞，體外培養(yǎng)，給予10-13～10-8mol/L1，25(OH)2D3干預(yù)，并觀測(cè)不同時(shí)段不同濃度1，25(OH

9、)2D3對(duì)巨噬細(xì)胞的影響，RT-PCR和Westernblot方法檢測(cè)不同干預(yù)組iNOS的表達(dá)。 結(jié)果：不同時(shí)段和不同干預(yù)濃度的1，25(OH)2D3均可以降低巨噬細(xì)胞iNOS的表達(dá)。 結(jié)論：1，25(OH)2D3通過(guò)降低體外哮喘大鼠巨噬細(xì)胞iNOS的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)哮喘。 課題主要結(jié)論： 1.哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3干預(yù)可降低哮喘氣道炎癥和改善肺功能。 2.哮喘大鼠給予1，25(OH)2D3