類維生素A對自發(fā)性高血壓大鼠心肌、血管平滑肌增殖的作用及其機(jī)制.pdf

1、1.背景與目的 類維生素A(維甲酸、ATRA)對心血管系統(tǒng)發(fā)育、成熟有重要作用，同時(shí)它對多種細(xì)胞具有抑制增殖的作用。近年來，ATRA對血管平滑肌(VSMC)增殖的抑制作用備受關(guān)注，但其對高血壓病引起的平滑肌增殖是否有相應(yīng)的抗增殖作用尚不清楚。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)是作用于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAS)而其效應(yīng)相反的兩個(gè)關(guān)鍵酶，ACE是一種鋅依賴性膜金屬蛋白酶，在其作用下產(chǎn)生的血管緊張素

2、Ⅱ(AngⅡ)具有血管收縮、促進(jìn)細(xì)胞增殖等作用；ACE2也是鋅依賴性膜金屬蛋白酶，是ACE同源物，能產(chǎn)生擴(kuò)血管的血管緊張素(1-7)(Ang-[1-7])并水解具有縮血管作用的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)而起降壓作用。因此它們在高血壓病的發(fā)生、發(fā)展及維持中起著重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)ATRA對RAS各種產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)有作用，但其作用機(jī)制還不清楚，是否與這兩個(gè)關(guān)鍵酶有關(guān)，目前還沒有被證實(shí)。本研究通過觀察ATRA對SHR心肌、血管平滑肌增殖和SH

3、R心肌ACE-mRNA、ACE-2mRNA表達(dá)的影響，擬探討ATRA是否對高血壓病的血管增殖有抑制作用及其在高血壓病中的作用機(jī)制。 2.方法 實(shí)驗(yàn)用18只15周齡雄性SHR大鼠，隨機(jī)分為三組：①維甲酸處理組；②溶媒對照組；③卡托普利處理組，每組各6只。各組大鼠給予SHR鼠專用飼料并自由進(jìn)食、飲水。處理組給予全反式維甲酸(alltrans-retinoicacid)處理，全反式維甲酸避光溶于5％二甲亞砜(DMSO)和95％

4、花生油，10mg·Kg-1體重皮下注射，每天1次；對照組給予每天皮下注射上述溶媒作為對照；卡托普利處理組給予卡托普利0.25mg·Kg-1管飼，療程均為4周。第29天處理大鼠時(shí)，大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈穿刺放血，于主動(dòng)脈根部分離主動(dòng)脈，同時(shí)取心臟左室心肌組織，均以4％多聚甲醛固定，石蠟包埋用免疫組織化學(xué)染色觀察各組SHR大鼠心肌、血管平滑肌(VSMC)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的變化。部分左室心肌組織-70℃凍存供逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)測心肌A

5、CE-mRNA、ACE2-mRNA的表達(dá)。 3.結(jié)果 1.溶媒對照組SHR的血漿AngⅡ明顯增高，維甲酸組與卡托普利組的血漿AngⅡ較溶酶對照組明顯減低(P＜0.01)，而兩組之間比較則無明顯差異(P＞0.05)。 2.HE染色光鏡下檢查：對心肌切片觀察各組未見明顯差異，心肌細(xì)胞均排列整齊，細(xì)胞間隙正常，無心肌纖維的破壞；對血管切片觀察見對照組血管平滑肌略厚，細(xì)胞略顯多；維甲酸組及卡托普利組則無明顯增厚，細(xì)胞排列

6、整齊。 3.免疫組化染色觀察SHR大鼠心肌、血管平滑肌(VSMC)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的變化。免疫組化染色鏡檢陽性信號呈紅色核表達(dá)。定量分析發(fā)現(xiàn)，ATRA組PCNA陽性染色顯著低于卡托普利組及對照組(P＜0.01)，而卡托普利組與對照組之間亦有顯著性差異(P＜0.01)。 4.RT-PCR用以檢測心肌ACE-mRNA、ACE2-mRNA的表達(dá)。ATRA組SHR大鼠ACE-mRNA表達(dá)和ACE2-mRNA表達(dá)水平較對

7、照組及卡托普利處理組均有明顯差異(P＜0.01)，卡托普利處理組與對照組比較，ACE-mRNA表達(dá)和ACE2-mRNA表達(dá)均無明顯差異(P＞0.05)。 4.結(jié)論 1.對照組SHR血漿AngⅡ明顯增高，而維甲酸和卡托普利處理可以明顯降低SHR的血漿AngⅡ。其原因是卡托普利抑制了ACE的活性，從而抑制AngⅠ向AngH轉(zhuǎn)換，也就減少了循環(huán)及局部組織中的升壓活性物質(zhì)AngⅡ。而維甲酸使SHR血漿AngⅡ下降則是因?yàn)榫S甲酸通

8、過影響腎素—血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的多方面基因表達(dá)，最終降低血漿AngⅡ，從而達(dá)到抑制心血管重塑的作用。 2.維甲酸和卡托普利處理28天后的心肌和大血管在HE染色光鏡下觀察其病理改變不明顯。這可能與觀察時(shí)間不長有關(guān)。 3.維甲酸、卡托普利可以抑制SHR心肌和血管平滑肌PCNA的表達(dá)，提示它們能有效抑制心血管平滑肌增殖；這種作用ATRA較卡托普利更明顯，其機(jī)制可能是其對AngⅡ具有更強(qiáng)的抑制作用。 4.維甲酸上調(diào)

9、ACE2-mRNA的表達(dá)而抑制ACE-mRNA表達(dá)，說明其通過調(diào)控RAS發(fā)揮有利的心血管功能調(diào)節(jié)作用，從而緩解高血壓病的發(fā)生、發(fā)展，進(jìn)而控制心血管重塑。 總之，本實(shí)驗(yàn)在SHR的模型上，證實(shí)了ATRA處理能有效抑制心血管平滑肌增殖，此作用機(jī)制可能在RAS的多個(gè)環(huán)節(jié)。也就是說，ATRA分別通過對ACE、ACE2、AngⅡ的作用，最終降低了血漿AngⅡ，增加了擴(kuò)血管物質(zhì)Ang-(1-7)，因而不僅能夠緩解不利的心血管重塑，還可能籍以上