安徽省豬病毒性腹瀉病因調(diào)查及PEDV分子流行病學(xué)研究.pdf

1、摘要豬病毒性腹瀉是由病毒引起的急性消化道傳染病，主要病原有豬流行性腹瀉病毒(Pcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)，豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissiblegatroenteritisconavirus，TGEV)，豬輪狀病毒(Rotavirus，RV)，豬瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)，豬圓環(huán)病毒(Pcinecircovirusvirus，PCV)，豬偽狂犬病毒(P

2、cinepseudprabiesvirus，PRV)。其流行從2010年底開(kāi)始在我國(guó)呈明顯的上升趨勢(shì)，尤其造成哺乳仔豬大量死亡，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。其中流行性腹瀉(pcineepidemicdiarrhea，PED)的危害最為嚴(yán)重，該病毒以損壞豬小腸為主，引起豬水樣腹瀉和嚴(yán)重脫水為主要臨床癥狀，已成為降低豬出欄率的重要原因之一。本文對(duì)安徽省部分地區(qū)豬場(chǎng)的豬腹瀉主要病毒性病原進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查和對(duì)PEDV的M、N、F3基因的遺傳進(jìn)化

3、進(jìn)行了研究，研究?jī)?nèi)容如下：(1)本研究對(duì)20102013年安徽省14個(gè)縣市的23個(gè)發(fā)生豬腹瀉的豬場(chǎng)采集了138份肛拭子、腸道及內(nèi)容物，利用(RT)PCR方法對(duì)病料中7種主要病毒性腹瀉病原進(jìn)行了檢測(cè)：CSFV、PRRSV、TGEV、PEDV、RV、PRV、PCV2等7種。檢測(cè)結(jié)果顯示，PED陽(yáng)性豬場(chǎng)有19個(gè)，陽(yáng)性率為82.6%，PED陽(yáng)性病料81份，PEDV陽(yáng)性率高達(dá)58.7%。其中CSFV、PRRSV、TGEV、RV、PRV、PCV2的

4、陽(yáng)性檢出率分別為2.9%、1.44%、2.17%、1.44%、4.35%、7.25%。多個(gè)豬場(chǎng)出現(xiàn)PEDV與其它病毒的混合感染，其中與PCV2的混合感染最為嚴(yán)重，混感率為6%?；旌细腥驹谪i腹瀉病中廣泛存在，圓環(huán)病毒由于其免疫抑制作用，出現(xiàn)更嚴(yán)重的臨床癥狀。(2)為了探討安徽省流行的PEDV遺傳變異情況，本研究對(duì)19個(gè)PED陽(yáng)性豬場(chǎng)的病料進(jìn)行了PEDV的遺傳變異相關(guān)基因M和N及毒力基因F3的擴(kuò)增及遺傳變異分析，以弄清安徽省PEDV分子流行

5、情況，為安徽省PED防控提供理論基礎(chǔ)。本研究參照Genbank中PEDV序列，設(shè)計(jì)4對(duì)特異性引物對(duì)PED陽(yáng)性的19個(gè)豬場(chǎng)的陽(yáng)性病料分別進(jìn)行M、N和F3基因的擴(kuò)增，擴(kuò)增獲得的片段經(jīng)切膠回收后連接pMD18T載體，挑取陽(yáng)性克隆并測(cè)序，并用DNASTAR和MEGA5.0等軟件將目的基因進(jìn)行同源性的比較和遺傳進(jìn)化分析。所擴(kuò)增的目的基因片段均有完整的開(kāi)放閱讀框，M基因大小為681bp，N基因?yàn)?326bp，F(xiàn)3基因?yàn)?75bp。M基因同源性分析表

6、明，安徽地區(qū)PEDV流行毒株M基因之間同源性為98.3%100%，與歐洲毒株(CV777；Br17)同源性為97.4%98.2%，與日本毒株(83p5)的同源性為97.4%98.4%，與韓國(guó)毒株(DR13；CPF531；PFF1051)同源性為97.1%98.2%，與我國(guó)其它省份：北京株(BJ2010)、廣東株(GDYD)、江蘇株(JS200402)、福建株(FJPT2011)、山東株(SDM)同源性為96.8%100%，與美國(guó)毒株(U