幽門螺桿菌基因型、cagA基因3’可變區(qū)生物功能以及與臨床結(jié)果關系的研究.pdf

1、幽門螺桿菌是定植于人胃黏膜、并引起部分感染者胃十二指腸疾病的革蘭氏陰性細菌。研究顯示其基因多態(tài)性與致病多樣性有關。H.pylori vaeh基因的表達產(chǎn)物VacA蛋白能引起上皮細胞空泡變性，并且vacA基因存在不同的基因表現(xiàn)型，即vacA基因有sla、slb、s2三種不同的信號序列和m1、m2兩種不同的中間區(qū)的等位基因變異，這些等位基因的嵌合體使得H.pylori的VacA蛋白的毒力不同，致病力的不同。H.pylori的cagA基因，編

2、碼的CagA蛋白，易位進入宿主胃上皮細胞，參與細胞的信號轉(zhuǎn)導及細胞骨架的重排。最新的研究發(fā)現(xiàn)，cagA基因3'可變區(qū)存在較多的重復序列，從而導致CagA蛋白變亞型的出現(xiàn)，并因而引起細菌毒力(致病力)的不同。研究還發(fā)現(xiàn)，cagA基因的3'可變區(qū)的EPIYA序列，和CagA蛋白的磷酸化有關。因此，本研究通過闡明鎮(zhèn)江地區(qū)分離的H.pylori菌株的vaeA基因型、cagA，cagA基因3'可變區(qū)結(jié)構(gòu)與H.pylori相關性胃腸疾病的關系。

3、 標本采集自在江蘇大學附屬醫(yī)院胃鏡室檢查的胃十二指腸疾病患者的胃黏膜。在微需氧條件下，分離培養(yǎng)H.pylarl臨床株，共60株，其中慢性胃炎13株；消化性潰瘍38株；胃癌13株。提取菌株基因組DNA后，應用PCR法檢測臨床分離H.pylori菌株的vaeh基因型、cagA基因；通過對cagA+H.pylori菌株的PCR產(chǎn)物進行轉(zhuǎn)化質(zhì)粒、測序，研究不同菌株cagA基因3'可變區(qū)的堿基序列及其氨基酸序列的多態(tài)性與臨床結(jié)果的關系；通過搜

4、索并收集GenBank中已公布的不同地區(qū)3-6個H.pylori cagA 3'端可變區(qū)序列及其氨基酸序列進行比較分析。 結(jié)果表明，60株H.pylori臨床分離菌株的vacA基因表現(xiàn)型，以sla/m2基因型為主，還有sla/ml、s2/m2型，未見slb、s2/ml基因型；93.3％(56/60)的鎮(zhèn)江菌株cagA基因型陽性，在不同病種之間，cagA基因陽性率無統(tǒng)計學差異；所選擇的20株、來自不同疾病的H.pylori菌株的c

5、agA基因+的PCR產(chǎn)物測序結(jié)果顯示：可以根據(jù)其序列中的重復序列的數(shù)目和主要序列的差異，將cagA基因3'可變區(qū)分為2個類型：東亞型和西方型，19株鎮(zhèn)江菌株表現(xiàn)為東亞型，1株表現(xiàn)為西方型，20株測序的cagA 3'可變區(qū)的重復序列EPIYA的數(shù)目均為3個，EPIYA的數(shù)目與臨床結(jié)果之間沒有關聯(lián)；按GenBank中檢索出來的順序，選擇日本菌株cagA 3端可變區(qū)序列6個，韓國3個，越南4個，美國3個，哈薩克斯坦3個，印度3個，愛爾蘭3個，

6、哥斯達黎加4個。共有49株H.pylori cagA 3'端可變區(qū)序列和相應的CagA蛋白氨基酸序列，通過序列分析發(fā)現(xiàn)CagA蛋白的氨基酸序列可分為具有明顯地域特征的東亞型和西方型兩類：部分東亞型菌株表現(xiàn)出西方型變異：87.4％的菌株具有3個串聯(lián)排列的EPIYA基序：新發(fā)現(xiàn)1條具有區(qū)域特征的含有3個氨基酸的序列。 本論文獲得如下的結(jié)論：1.鎮(zhèn)江地區(qū)H.pylori菌株的vacA基因型有sla/ml、sla/m2、s2/m2型，以

7、sla/m2為主，沒有s2/ml、slb基因型； 2.鎮(zhèn)江地區(qū)H.pylori菌株的cagA檢出率為93.3％，與國內(nèi)的報道相似。3.cagA基因型、vacA基因型的檢出率在各疾病組間無顯著差異； 4.鎮(zhèn)江地區(qū)H.pylori菌株的cagA基因3'可變區(qū)主要表現(xiàn)為東亞型，與日本、韓國菌株相似；5.中國鎮(zhèn)江地區(qū)的cagA基因3'可變區(qū)的EPIYA序列的數(shù)目多為3個；6.cagA基因3'可變區(qū)的類型95.0％(19/20，95.0％)為東亞