CHD1L在肝臟發(fā)育過程中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景與目的:CHD1L(Chromodomain Helicase/Adenosine Triphosphatase DNA Binding Protein 1-Like)是近年新發(fā)現(xiàn)的肝癌特異性表達(dá)基因，在正常肝組織內(nèi)不表達(dá)，其編碼的蛋白質(zhì)有SNF家族的特征性結(jié)構(gòu)，具備SNF蛋白家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色質(zhì)重構(gòu)、調(diào)節(jié)蛋白-DNA結(jié)合等功能的分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，但其確切作用及機(jī)制目前所知甚少。腫瘤形成與胚胎發(fā)育在增殖、分化、基因表達(dá)等方面極為相

2、似，提示胚胎發(fā)育與腫瘤發(fā)生有內(nèi)在的聯(lián)系。胚胎肝臟是研究肝干細(xì)胞增殖分化的一個(gè)極佳模型，中胚層起源的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)胚層起源的上皮細(xì)胞在胎肝微環(huán)境中共同發(fā)育成熟，在此過程中CHD1L基因是否表達(dá)、其表達(dá)定位特點(diǎn)等國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道，而CHD1L表達(dá)規(guī)律及定位特點(diǎn)對(duì)于闡明CHD1L與肝癌發(fā)生的關(guān)系有重要意義，本文對(duì)此展開研究。
　　 方法:
　　 本研究采用RT-PCR方法、Western blot方法及免疫組織

3、化學(xué)、免疫熒光雙標(biāo)記方法，從mRNA水平及蛋白質(zhì)水平研究小鼠胎肝發(fā)育過程中CHD1L的表達(dá)及演變規(guī)律；并在人胎肝、胎盤及肝癌組織中對(duì)其表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)確定表達(dá)細(xì)胞類別。
　　 結(jié)果:
　　 1、小鼠胎肝內(nèi)CHD1L表達(dá)：E12.5開始小鼠胎肝內(nèi)出現(xiàn)微弱的CHD1L mRNA表達(dá)，E13.5-E15.5表達(dá)達(dá)峰值，E16.5之后表達(dá)逐步減弱，至E18.5表達(dá)消失，CHD1L表達(dá)隨Albumin表達(dá)增強(qiáng)而逐漸減弱并消失。免

4、疫組化結(jié)果顯示E13.5-E15.5胎鼠肝內(nèi)有明顯的CHD1L陽性表達(dá)細(xì)胞，分別定位于肝細(xì)胞索內(nèi)、血竇內(nèi)造血細(xì)胞及血竇內(nèi)皮的胞核，其中以血竇內(nèi)造血細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)占多數(shù)。E15.5之后未見明顯的CHD1L陽性表達(dá)細(xì)胞。在7wk-8wk人胚肝內(nèi)有明顯的CHD1L陽性表達(dá)細(xì)胞，散在于肝細(xì)胞索及肝血竇腔內(nèi)，22wk-24wk胎肝則未見CHD1L表達(dá)。
　　 2、人胎盤絨毛組織中CHD1L表達(dá)及細(xì)胞鑒定：妊娠早期（6wk-8wk）人

5、胎盤絨毛組織中有較強(qiáng)的CHD1L mRNA及蛋白表達(dá)，妊娠中期（20wk-24wk）絨毛組織中CHD1L表達(dá)水平明顯下降。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示絨毛組織血管腔內(nèi)、血管內(nèi)皮及絨毛間充質(zhì)組織內(nèi)可見散在CHD1L+/CD34-及CHD1L+/C D34+兩種陽性標(biāo)記細(xì)胞。
　　 3、肝癌組織內(nèi)CHD1L表達(dá)及細(xì)胞鑒定：癌巢細(xì)胞有CHD1L陽性表達(dá)，癌巢周圍結(jié)締組織內(nèi)尚可見卵圓形或長(zhǎng)桿狀的CHD1L陽性胞核，散在分布。CHD1L與CD34

6、免疫熒光雙標(biāo)記顯示癌巢內(nèi)細(xì)胞為CHD1L+/CD34-，癌巢周圍結(jié)締組織內(nèi)有CHD1L+/CD34-及CHD1L+/CD34+兩種細(xì)胞。
　　 結(jié)論:
　　 1、小鼠胎肝發(fā)育過程中有CHD1L動(dòng)態(tài)表達(dá)，表達(dá)峰値時(shí)間為E13.5-E15.5，隨胎肝細(xì)胞分化成熟CHD1L表達(dá)消失，提示CHD1L表達(dá)與肝細(xì)胞發(fā)育分化密切相關(guān)。
　　 2、CHD1L表達(dá)于中胚層來源的造血干細(xì)胞、胚胎性內(nèi)皮細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞。