Nischarin蛋白及其下游信號分子在大鼠腦發(fā)育過程中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:腦發(fā)育過程中，長期精確的發(fā)育調(diào)控過程形成了腦獨(dú)特的構(gòu)造。Nischarin是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型蛋白。在現(xiàn)階段，關(guān)于Nischarin的研究主要集中在抑制腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲等功能，然而對于Nischarin在神經(jīng)系統(tǒng)中所起作用方面的研究較少?；罨っ?P21-activated kinases，PAK)和LIM激酶(LIM kinases，LIMK)是Rho-GTPases家族的下游分子，對神經(jīng)系統(tǒng)的功能有重要影響。有研究發(fā)現(xiàn)，N

2、ischarin可以抑制PAK1和LIMK1的活性，并且通過Rho GTPase信號通路引發(fā)骨架蛋白重組，從而抑制腫瘤細(xì)胞遷移。近期研究還發(fā)現(xiàn)，Nischarin在大鼠腦組織中高度表達(dá)，并且在腦區(qū)的分布呈現(xiàn)區(qū)域化。探索腦正常發(fā)育過程的分子機(jī)制，對于神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的診斷和治療具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)研究Nischarin及其下游PAK、LIMK、confilin在大鼠腦發(fā)育過程中的變化及其意義。方法:采用western blot、熒光定量

3、RT-PCR技術(shù)檢測在鼠胚胎及出生后不同發(fā)育時(shí)間腦組織中Nischarin表達(dá)、PAK磷酸化、LIMK磷酸化及cofilin磷酸化水平的改變;免疫共沉淀等技術(shù)研究大腦皮層中Nischarin與PAK以及LIMK的互作關(guān)系;在Neuro-2a（小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞）細(xì)胞上研究Nischarin磷酸化調(diào)控PAK、LIMK、cofilin的機(jī)制;通過細(xì)胞劃痕技術(shù)研究PC-12（腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤）細(xì)胞上Nischarin對細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:

4、1）Nischarin的蛋白和mRNA水平在大鼠腦皮層、海馬和小腦中，呈現(xiàn)發(fā)育第四周增高的趨勢;2）PAK蛋白的磷酸化水平在大鼠腦皮層和海馬發(fā)育過程中，在出生后14天至28天呈現(xiàn)減少的趨勢;3）LIMK蛋白的磷酸化水平在大鼠腦皮層和海馬發(fā)育過程中，在出生后14天至28天隨發(fā)育進(jìn)程呈現(xiàn)減少的趨勢;LIMK蛋白的磷酸化水平在大鼠小腦發(fā)育過程中，在出生后14天與28天下降;4）cofilin蛋白的磷酸化水平在大鼠腦皮層和海馬發(fā)育過程中，在出生

5、后21天到28天磷酸化水平下降;5）大鼠大腦皮層中，存在PAK和Nischarin的穩(wěn)定結(jié)合以及LIMK和Nischarin的穩(wěn)定結(jié)合;6）Neuro-2a細(xì)胞上，Nischarin對PAK的磷酸化有直接抑制作用，但不能直接抑制LIMK和cofilin的磷酸化;7）在體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞PC-12上Nischarin可抑制其遷移能力。結(jié)論:通過實(shí)驗(yàn)我們認(rèn)為Nischarin可能通過調(diào)控PAK及其下游LIMK和cofilin蛋白的磷酸化以及