失神經(jīng)再支配后環(huán)杓后肌電生理及組織學(xué)特性的研究.pdf

1、研究背景及意義:
　　 聲帶麻痹是臨床上常見的問題,它有很多因?yàn)?最主要的因?yàn)槭怯捎诤矸瞪窠?jīng)受到損傷而導(dǎo)致。在過去的幾十年里,治療聲帶麻痹一直是學(xué)者們感興趣的研究內(nèi)容,但是至今為止,仍然沒有一種令人滿意的治療方法。理想的治療效果是恢復(fù)聲帶的生理性的運(yùn)動(dòng)功能。目前治療聲帶麻痹有很多方法,包括聲帶注射脂肪或注射膠原等注射術(shù),甲狀軟骨成形術(shù)和杓狀軟骨內(nèi)轉(zhuǎn)術(shù),此外,大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為喉返神經(jīng)再支配是最有前景的方法,它可以恢復(fù)正常的聲音,并恢

2、復(fù)喉的其他一些重要的功能。這些方法或多或少都有一定的效果,但都存在不足之處。
　　 哺乳動(dòng)物的喉肌是高度分化的器官,有著特殊的功能,比如控制呼吸,保護(hù)氣道和發(fā)聲等。肌球蛋白是肌肉中含量最豐富的收縮蛋白,肌球蛋白的亞型決定了ATP酶的活性、最大收縮速度和最大力量。所以肌球蛋白被認(rèn)為是代表肌纖維功能特性最佳的指標(biāo)。肌球蛋白分了由2個(gè)肌球蛋白重鏈(MyHC)和4個(gè)肌球蛋白輕鏈(MyLC)組成。ATP酶的活性和運(yùn)動(dòng)功能主要局限在肌球蛋白

3、的MyHC亞基上面。喉肌在神經(jīng)再支配后,MyHC發(fā)生了怎樣的變化,以及這些變化和它們控制喉肌功能之間的關(guān)系尚不清楚。我們的研究就是為了明確喉肌失神經(jīng)再支配后電生理特性的變化和MyHC亞型表達(dá)的變化,探索喉肌失神經(jīng)再支配后MyHC亞型表達(dá)的變化規(guī)律,從而為臨床上治療喉肌失神經(jīng)后功能的恢復(fù)提供理論基礎(chǔ)和研究方向。本研究包括以下兩部分:
　　 第一章 雙側(cè)頸袢神經(jīng)再支配環(huán)杓后肌電生理特性研究
　　 目的:
　　 將頸袢

4、神經(jīng)近心端同喉返神經(jīng)遠(yuǎn)心端吻合常常使用在重建喉肌功能的手術(shù)中,吻合后環(huán)杓后肌的電生理特性可能發(fā)生改變,我們?yōu)檠芯凯h(huán)杓后肌失神經(jīng)再支配后的電生理變化而做此研究。
　　 對(duì)象與方法:
　　 1.成年家犬購于廣東省人民醫(yī)院-廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物研究中心,總共14只。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組7只家犬全麻下手術(shù)暴露雙側(cè)喉返神經(jīng)后,將其切斷,立即將頸袢神經(jīng)近心端與喉返神經(jīng)遠(yuǎn)心端相吻合,飼養(yǎng)9周；正常對(duì)照組7只家犬切開皮膚,同樣

5、暴露并游離出雙側(cè)喉返神經(jīng),不切斷喉返神經(jīng),縫合切口,飼養(yǎng)9周。
　　 2.9周后,實(shí)驗(yàn)組家犬傘麻下手術(shù)暴露神經(jīng)吻合處,采用功能性電刺激刺激環(huán)杓后肌,并記錄對(duì)應(yīng)的聲門開大移動(dòng)最大值、聲門開最大電刺激電壓閾值和聲門開大聲帶移動(dòng)電壓閾值。正常對(duì)照組同樣測量這三個(gè)值。
　　 3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析。所得計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組結(jié)果比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent Sample

6、s TTest),P<0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)組的聲門開大移動(dòng)最大值是(3.0±0.8)mm,正常組的聲門開大移動(dòng)最大值是(3.8±1.1)mm。t=-1.506,P=0.158。實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組的聲門開最大電刺激電壓閾值是(4.86±1.46)V,正常組的聲門開最大電刺激電壓閾值是(3.36±1.25)V。t=2.063,P=0.061。實(shí)驗(yàn)組

7、和正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.實(shí)驗(yàn)組的聲門開大聲帶移動(dòng)閾值是(0.46±0.15)V,正常組的聲門開大聲帶移動(dòng)閾值是(0.39±0.21)V。t=0.736,P=0.476。實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn),吻合組使用同正常組相近的電壓刺激環(huán)杓后肌就可以產(chǎn)生聲帶移動(dòng),聲帶最大外展時(shí)兩組的刺激電壓大小也相近,提示了吻合后的神經(jīng)在其電生理特性上接近于正常。說明了利用

8、頸袢神經(jīng)近心端吻合喉返神經(jīng)遠(yuǎn)心端9周后動(dòng)物的環(huán)杓后肌對(duì)電刺激的敏感性同正常的環(huán)杓后肌非常接近。盡管神經(jīng)吻合后不能恢復(fù)環(huán)杓后肌的主動(dòng)外展,但是通過木實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),使用頸袢神經(jīng)吻合喉返神經(jīng)遠(yuǎn)端,可以重建并恢復(fù)環(huán)杓后肌的電生理功能,使環(huán)杓后肌的電生理狀態(tài)在失神經(jīng)再支配后幾乎維持在接近正常的狀態(tài),這樣就可以防止失神經(jīng)肌肉萎縮及肌纖維化,進(jìn)而使用較小的電刺激就能夠促使頸袢神經(jīng)重建的環(huán)杓后肌發(fā)生收縮,從而達(dá)到開大聲門的目的。說明了環(huán)杓后肌失神經(jīng)后,用頸

9、袢吻合喉返神經(jīng)9周后,可以防止肌萎縮,促使聲帶運(yùn)動(dòng)等喉肌功能的恢復(fù),這為進(jìn)一步的喉起搏器的改進(jìn)提供了電生理學(xué)的基礎(chǔ)。
　　 第二章 雙側(cè)頸袢神經(jīng)再支配環(huán)杓后肌組織化學(xué)特性研究
　　 目的及意義:
　　 1.檢測環(huán)杓后肌中肌球重鏈蛋白(MyHC)亞型及膠原纖維在mRNA水平的表達(dá)。
　　 2.比較環(huán)杓后肌失神經(jīng)及再支配后肌球重鏈蛋白各個(gè)亞型及膠原纖維在mRNA水平的表達(dá)所發(fā)生的變化。
　　 材料和方

10、法:
　　 1.標(biāo)本的獲取:成年家犬購于廣東省人民醫(yī)院-廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物研究中心,總共24只。隨機(jī)分為切斷組、吻合組和正常對(duì)照組。切斷組8只家犬全麻下手術(shù)暴露雙側(cè)喉返神經(jīng)后,將其切斷,并將近心端反折結(jié)扎,飼養(yǎng)9周；吻合組8只家犬全麻下手術(shù)暴露雙側(cè)喉返神經(jīng)后,將其切斷,立即將頸袢神經(jīng)近心端與喉返神經(jīng)遠(yuǎn)心端相吻合,飼養(yǎng)9周;正常對(duì)照組8只家犬同樣全麻下手術(shù)切開皮膚,暴露并游離出雙側(cè)喉返神經(jīng),不切斷喉返神經(jīng),縫合切口,飼養(yǎng)9周。<

11、br>　　 9周后,切斷組、吻合組及正常對(duì)照組家犬均在全麻下取左側(cè)環(huán)杓后肌標(biāo)本,供提取RNA用。
　　 2.提取切斷組、吻合組及正常對(duì)照組肌肉標(biāo)本的總RNA,然后對(duì)總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,用Real-time PCR方法對(duì)3組肌肉標(biāo)本中的各型肌纖維及膠原纖維mRNA的表達(dá)量進(jìn)行定量分析,并比較3組環(huán)杓后肌標(biāo)木中各型MyHC亞型和膠原纖維表達(dá)的差異。
　　 3.對(duì)Real-time PCR產(chǎn)物用瓊脂糖電泳技術(shù)進(jìn)行檢測,驗(yàn)證3

12、組動(dòng)物的環(huán)杓后肌中各MyHC亞型和膠原纖維的表達(dá)。
　　 4.采用SPSS13.0軟件分析,所有計(jì)量資料以(x)±S表示,組間差異采用單因素方差分析,P值<0.05作為顯著性差異的界限。組間多重比較用LSD法,P值<0.05作為顯著性差異的界限。
　　 結(jié)果:
　　 1.正常對(duì)照組和吻合組中均有一只家犬因術(shù)后感染而死亡。
　　 2.切斷組、吻合組及正常對(duì)照組三組動(dòng)物的環(huán)杓后肌中均檢測到以下6種MyHC亞型

13、的mRNA表達(dá):Ⅰ,ⅡA,ⅡB,ⅡX,Neonatal及Collagen Ⅰ。
　　 3.切斷組、吻合組及正常對(duì)照組三組動(dòng)物的環(huán)杓后肌中均沒有EO型MyHC的表達(dá)。
　　 4.正常組(n=7)中Ⅰ、ⅡA、ⅡB、ⅡX、Neonatal、Collagen Ⅰ型MyHC基因的表達(dá)量(()X±S)分別為:0.36±0.36,0.01±0.27,-2.69±0.55,0.34±0.81,-2.06±0.40,-1.31±0.66；

14、切斷組(n=8)中Ⅰ、ⅡA、ⅡB、ⅡX、Neonatal、Collagen Ⅰ型MyHC基因的表達(dá)量((x)±S)分別為:0.88±0.26,0.54±0.26,-2.71±0.52,-0.04±0.64,-0.38±0.32,-0.90±0.63;吻合組(n=7)中Ⅰ、ⅡA、ⅡB、ⅡX、Neonatal、Collagen Ⅰ型MyHC基因的表達(dá)量((x)±S)分別為:0.26±0.29,-0.08±0.93,-3.40±1.03,-0

15、.93±0.86,-1.61±0.60,-1.72±0.68。
　　 5.Ⅰ、ⅡX和Neonatal型MyHC在正常組、切斷組及吻合組間的表達(dá)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P值分別為0.002,0.017和0.000;而ⅡA、ⅡB和CollagenⅠ型MyHC在正常組、切斷組及吻合組間的表達(dá)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P值分別為0.094,0.138,0.079。
　　 結(jié)論:
　　 1.家犬的環(huán)杓后肌中含有Ⅰ型、ⅡA型、ⅡB型、ⅡX

16、型、Neonatal型MyHC及Collagen Ⅰ型MyHC,沒有EO型MyHC的表達(dá)。
　　 2.家犬的環(huán)杓后肌失神經(jīng)9周后,Ⅰ型MyHC和Neonatal型MyHC在mRNA水平表達(dá)量增高,而用頸袢神經(jīng)再支配9周后,Ⅰ型MyHC和Neonatal型MyHC在mRNA的水平恢復(fù)至正常水平。提示喉肌功能的部分恢復(fù),說明了喉肌有一定的可塑性。
　　 3.我們的結(jié)果提示:為了適應(yīng)整個(gè)身體器官的移動(dòng)并對(duì)身體提供一些特殊的功能