異種（豬）骨酶法處理及用作骨修復材料的研究.pdf

1、骨缺損是骨科常見疾病，很多骨缺損由于間隙大而不能自然愈合。到目前為止，修復這些骨缺損的主要方法是骨移植。骨移植有自體骨移植、異體骨移植和異種骨移植三種。自體骨移植取骨區(qū)域有限及并發(fā)癥的存在以及異體骨同樣存在來源有限并有感染疾病的危險，因此人們把目光轉(zhuǎn)向異種骨。 異種骨來源廣泛，但是未經(jīng)處理的異種骨不僅有傳染疾病的可能性而且有較嚴重的免疫排斥反應。為此，人們已經(jīng)并正在研究異種骨用于骨缺損修復的較好的處理方法。目前研究較多的是采用氧

2、化劑的方法來處理異種骨以消除其中的抗原性，并取得一定進展。但是采用氧化劑的方法造成了異種骨力學性能變差以及經(jīng)處理后的異種骨生物功能性不佳的缺點。所以，有必要尋找更好的處理方法以適應骨修復的需要。 經(jīng)過異種骨成分分析以及考慮骨缺損修復對材料的要求，選擇用酶去除異種骨中非膠原蛋白而保留膠原蛋白和無機質(zhì)，從而既消除異種骨的抗原性又保證經(jīng)處理后的異種骨有較好的力學性質(zhì)和生物學性能。 選擇豬股骨密質(zhì)骨作為研究對象，異種骨的處理包括

3、前處理、脫脂、酶處理三個過程。以骨中氮的含量為指標分析脫脂條件對異種骨脫脂的影響，當異種骨中含氮量基本不變時為最佳脫脂條件。實驗發(fā)現(xiàn)脫脂48小時即能夠脫除異種骨中的大部分脂肪。通過測定酶解溶出的羥脯氨酸量以確定酶處理中骨膠原蛋白的損失，實驗發(fā)現(xiàn)酶處理對異種骨中膠原破壞較小，溶出的羥脯氨酸不超過0.55％。同時，酶處理后的異種豬骨拉伸強度沒有降低，表明酶處理對異種豬骨中膠原及膠原與無機質(zhì)的結(jié)合不造成有害影響。以色氨酸含量為指標分析酶解條件

4、對去除非膠原蛋白的影響，發(fā)現(xiàn)濃度1％、pH8.0的酶溶液有較好效果。研究還發(fā)現(xiàn)，1％的低溫軟化酶作用時間應至少在18小時以上才能較好地除去異種骨中非膠原蛋白。用紅外光譜檢測了解異種骨經(jīng)各次處理后的成分的變化，并用X射線衍射分析處理過程骨鹽結(jié)晶的破壞情況，發(fā)現(xiàn)異種骨經(jīng)處理后脂質(zhì)減少，羥基磷灰石結(jié)晶狀態(tài)變化不大。 為了了解異種骨經(jīng)處理后是否還存在強烈的抗原性，設計家兔橈骨中段1.5cm缺損，將酶處理后的異種骨植入。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附染色