ATP生物發(fā)光快速檢測技術(shù)在輻照農(nóng)產(chǎn)品中的應(yīng)用研究.pdf

1、輻照品輻照前含菌量的確定，為輻照加工過程中選擇適宜的輻照劑量提供依據(jù)；提供一種既靈敏、簡便，又能快速檢測輻照滅菌效果的方法已成為輻照行業(yè)目前迫切需要解決的問題。本課題主要開展了兩個部分的實(shí)驗(yàn)工作。第一部分是：以脫水蔬菜和調(diào)味品為材料，進(jìn)行了樣品輻照前含菌量的快速檢測方法研究；第二部分是：以脫水蔬菜和調(diào)味品為材料，對樣品的輻照滅菌效果進(jìn)行了初步的研究。試驗(yàn)結(jié)果如下： 1.脫水蔬菜和調(diào)味品輻照前含菌量的ATP發(fā)光快速分析技術(shù)研究

2、 1.1輻照對菌落總數(shù)和大腸桿菌殺菌效果的比較實(shí)驗(yàn)脫水蔬菜和調(diào)味品中的致病菌主要是大腸桿菌，而從研究結(jié)果中可以看出，大腸桿菌的輻照殺死劑量遠(yuǎn)小于其他普通紐菌。因此，只要控制脫水蔬菜和調(diào)味品中的細(xì)菌總量，就可以保證其達(dá)到企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。而ATP生物發(fā)光法所研究的對象就是樣品中的細(xì)菌總數(shù)。 1.2ATP的發(fā)光強(qiáng)度與樣品含菌量的相關(guān)性分析ATP的發(fā)光強(qiáng)度與ATP濃度之間具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.99。應(yīng)用細(xì)菌ATP

3、生物發(fā)光技術(shù)測定脫水蔬菜和調(diào)味品的輻照前含菌量，從樣品的制備到ATP發(fā)光強(qiáng)度的測定僅需1～2小時，脫水蔬菜和調(diào)味品中細(xì)菌ATP的生物發(fā)光強(qiáng)度與其含菌量之間呈顯著正相關(guān)。 實(shí)驗(yàn)中三種調(diào)味品的三條曲線之間的斜率有所不同。分析其原因，除了試驗(yàn)誤差外，主要是由于樣品溶液帶有的顏色不同所導(dǎo)致的光子淬滅程度不同。 2.脫水蔬菜和調(diào)味品輻照滅菌效果的生物發(fā)光快速分析技術(shù)的初步研究 2.1輻照對樣品細(xì)菌ATP生物發(fā)光的影響變化研

4、究樣品細(xì)菌ATP發(fā)光隨輻照劑量的增加都比對照有所增加，特別是在5.0kGy時，細(xì)菌ATP發(fā)光達(dá)到最大值，與理論情況：輻照劑量越大，細(xì)菌含量越少，ATP發(fā)光值也越小不符。這種現(xiàn)象不但在脫水香蔥粉中存在，在其他調(diào)味品中也同樣出現(xiàn)，并不因樣品的不同而改變；我們也曾采用三氯醋酸提取法對經(jīng)輻照后樣品中細(xì)菌的ATP進(jìn)行提取，但測試結(jié)果變化趨勢依舊，說明了ATP生物發(fā)光值的升高與提取方法無關(guān)；通過對輻照樣品的連續(xù)跟蹤測定，發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象具有較長的時效性

5、，持續(xù)達(dá)50d左右。 壓力蒸汽滅菌是目前常用的滅菌方法，應(yīng)用ATP生物發(fā)光法進(jìn)行了121℃壓力蒸汽滅菌效果檢測的研究，從結(jié)果來看，經(jīng)121℃壓力蒸汽滅菌的樣品其發(fā)光值隨著滅菌時間的增加，ATP發(fā)光值不斷減?。辉趹?yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)快速測定細(xì)菌的藥物敏感性時，隨著慶大霉素濃度的增加，細(xì)菌ATP的發(fā)光逐漸變小。都與理論情況相符。綜合試驗(yàn)結(jié)果和有關(guān)報道，與壓力蒸汽滅菌和藥物滅菌有所不同，γ射線產(chǎn)生的輻射效應(yīng)已對細(xì)菌ATP生物發(fā)光的檢

6、測產(chǎn)生了影響。 2.2輻照后樣品細(xì)菌ATP發(fā)光反應(yīng)動力學(xué)分析發(fā)光動力學(xué)分析表明，未輻照樣品和輻照樣品發(fā)光曲線變化趨勢相同，但輻照后樣品的截距Y0大于未輻照樣品，而且發(fā)光值衰減速率常數(shù)k值也高于未輻照的樣品，并且差異顯著。 2.3輻照對樣品中細(xì)菌ATP的影響研究應(yīng)用紫外分光光度計對輻照后細(xì)菌ATP進(jìn)行了動態(tài)變化的研究，結(jié)果顯示，隨著輻照劑量的增加，細(xì)菌ATP含量不斷減少；而對ATP標(biāo)樣的研究表明，隨著輻照劑量的增加，ATP

7、的發(fā)光逐漸降低。綜合試驗(yàn)結(jié)果可以看出，樣品輻照后細(xì)菌ATP發(fā)光增強(qiáng)不是由于ATP的增加或使ATP處于激發(fā)態(tài)而引起的，及與ATP本身無關(guān)。 2.4輻照對細(xì)菌ATP生物發(fā)光的干擾途徑分析對細(xì)菌載體和樣品細(xì)菌洗脫液的研究表明，輻照后ATP發(fā)光增強(qiáng)是由電離輻射對細(xì)菌的輻射生物學(xué)效應(yīng)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物所造成的，而與細(xì)菌的載體無關(guān)(本實(shí)驗(yàn)中的脫水蔬菜和調(diào)味品)。而熒光素—熒光素酶中混有的雜酶，可能是引起干擾的另一個方面的原因。 2.5輻