輻照對ATP生物發(fā)光法檢測脫水蔬菜中細菌含菌量的影響.pdf

1、ATP(adenosine triphosphate，三磷酸腺苷又稱腺苷三磷酸)生物發(fā)光測定技術具有方便、快捷等特點，加之對ATP測定的特異性和高靈敏度，因而在臨床醫(yī)學的細菌檢驗方面得到了廣泛的應用，并為世界衛(wèi)生組織(WHO)所確認，目前這一技術在發(fā)達國家已越來越多地用于細菌的檢驗。
　　 應用ATP生物發(fā)光技術測定細菌方法的理論基礎在于ATP普遍存在于包括細菌在內的一切活細胞內，并且在一定條件下其含量相對穩(wěn)定，當細菌死亡時體內

2、的ATP將被自身的酶所降解，從而使得ATP的存在成為檢測樣品中有無細菌的依據(jù)；在定量測定ATP的方法中，以熒光素-熒光素酶測定法最為靈敏，當所有反應物過量時，其發(fā)光強度與ATP的數(shù)量成正比，因此根據(jù)細菌ATP提取液的發(fā)光強度即可推算出樣品含菌量的多少。
　　 但高岳等(2007)在應用ATP生物發(fā)光技術檢測脫水香蔥和胡椒粉的輻照滅菌效果時，卻出現(xiàn)了樣品細菌ATP提取液的發(fā)光強度均高于對照，與實際含菌量動態(tài)變化不一致的現(xiàn)象，其影響

3、機理尚不清楚，目前也未見報道。
　　 為了使ATP生物發(fā)光檢測技術能在產(chǎn)品的輻照滅菌效果方面得以應用，本文圍繞輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響進行了研究，結果表明：
　　 1、應用ATP生物發(fā)光技術分別檢驗輻照處理后脫水蔬菜中的含菌量，均出現(xiàn)了發(fā)光強度與實際含菌量兩者動態(tài)變化不一致的現(xiàn)象，說明了輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響具有普遍性。
　　 2、通過光譜分析可以看出：
　　 1)輻

4、照前、后樣品細菌ATP提取液生物發(fā)光光譜的波長范圍相同，光譜峰值對應的波長也無顯著差異，依據(jù)以上兩個光譜特征分析，輻照并未改變樣品的發(fā)光性質，由此可以認定輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響是通過ATP生物發(fā)光系統(tǒng)表現(xiàn)出來的。
　　 2)輻照對樣品細菌ATP提取液生物發(fā)光光譜的峰值產(chǎn)生了影響。光譜曲線峰值的升高，說明輻照處理增加了樣品細菌ATP提取液中ATP的濃度。
　　 3、對高溫滅菌后的脫水蔬菜進行輻照處理，并

5、應用ATP生物發(fā)光技術檢測樣品的發(fā)光強度，結果表明輻照后的脫水蔬菜材料本身并沒有對ATP的生物發(fā)光強度產(chǎn)生影響；而應用ATP生物發(fā)光技術檢測輻照處理后大腸桿菌菌液的含菌量時，卻出現(xiàn)了發(fā)光強度與實際含菌量不一致的現(xiàn)象，說明輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響來自于輻照處理后的細菌。
　　 4、輻照處理后大腸桿菌菌液樣品中游離ATP的發(fā)光強度均極顯著的高于對照。發(fā)光強度的升高說明輻照處理已明顯的增加了樣品中游離ATP的數(shù)量。輻

6、照處理并未增加LB無菌培養(yǎng)液ATP的生物發(fā)光強度，樣品中增加的游離ATP只能來自于輻照后的大腸桿菌。
　　 5、對大腸桿菌總ATP酶活性的測定結果顯示輻照劑量越大、樣品總ATP酶的活性就越低。ATP酶是分解ATP的專一性酶，ATP酶活性的降低，使死亡細菌體內ATP的降解受阻，增加了樣品中游離ATP的數(shù)量。
　　 6、在去除樣品中游離ATP后，樣品細菌ATP提取液的生物發(fā)光強度與樣品的含菌量兩者的動態(tài)變化已趨于一致，由此可

7、以說明輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響是由于樣品中游離ATP濃度的增加所造成的。
　　 綜上所述，輻照對脫水蔬菜細菌ATP生物發(fā)光檢測的影響是由于電離輻射在殺滅樣品中細菌的同時，也降低了細菌體內ATP酶的活性，使死亡細菌體內的ATP不能隨細菌的死亡而迅速降解，并從細菌體內擴散出來，從而增加了樣品中游離ATP的數(shù)量，導致了細菌ATP提取液的發(fā)光強度與實際含菌量動態(tài)變化趨勢的不一致。因此在應用ATP生物發(fā)光技術檢測產(chǎn)品的輻