豬圓環(huán)病毒2型陜西株的分離鑒定及其ORF2基因的序列分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型感染是近些年新發(fā)現(xiàn)的豬的傳染病，主要包括斷奶豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、懷孕母豬繁殖障礙、斷奶豬和育肥豬的呼吸道疾病、豬皮炎和腎炎綜合征、幼齡仔豬A<,2>型先天性震顫、間質(zhì)性肺炎(intersticial pneumonia，IP)、增生性壞死性肺炎(proliferative and neerotizing pneumonia，PNP)等。PCV2感染能降低豬體免疫力，常引起其他病原微生物的繼發(fā)或并發(fā)感染，加重病情。該病在世界

2、許多國家和地區(qū)的廣泛流行，已經(jīng)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。我國自從2000年郎洪武首次報道檢測出PCV抗原以來，北京、浙江、四川、黑龍江等省也報道了有PCV2的感染，并分離到各地PCV2流行毒株。在陜西省也可見到很多臨床上疑似PCV2感染的病例，但目前僅有一篇關(guān)于PCV2感染的血清學(xué)調(diào)查報道，還未見有關(guān)PCV2的病原學(xué)和分子生物學(xué)方面的報道，因此本研究開展了陜西省PCV2的分離鑒定及其主要結(jié)構(gòu)蛋白的編碼基因ORF2

3、的克隆和序列分析等=工作。主要內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.根據(jù)GenBank中已發(fā)表的豬圓環(huán)病毒(PCV1和PCV2)基因序列，設(shè)計并合成2對特異性引物，對8個規(guī)?；i場內(nèi)124頭豬的病料進行了PCV2檢測，檢測到了78份PCV2陽性病料，受檢豬組織樣品中PCV2 PCR檢測的陽性率為62.9％。結(jié)合臨床發(fā)病情況、PCR檢測結(jié)果及病理觀察，證實了陜西規(guī)?；i場普遍存在PCV2感染。 2.將PCR檢測為PCV2陽性的組織樣品處理

4、后接種到無PCV污染的PK-15細胞中傳代，盲傳6代后間接免疫熒光鑒定，在接毒細胞內(nèi)觀察到了特異性免疫熒光。同時進行PCR鑒定，擴增出了預(yù)期長度的PCV2的DNA片段。由此證明，分離出的病毒是PCV2型。通過上述方法，本試驗在陜西省共分離到5株P(guān)CV2。 3.根據(jù)GenBank中豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的基因序列，設(shè)計1對PCV2的ORF2特異性引物，將本實驗室分離的5株P(guān)CV2 ORF2基因克隆入pMDl8-T載體，篩選出陽

5、性重組質(zhì)粒pMD-T-ORF2進行測序，并將測序結(jié)果與國內(nèi)外已發(fā)表的參考毒株進行序列比對分析。結(jié)果表明，分離到的5株P(guān)CV2的ORF2基因大小相同，都為702 bp，編碼一條233個氨基酸組成的多肽；其核苷酸與參考毒株的同源性為90.5％～99.7％，氨基酸同源性為81.2％～97.4％；本研究分離的5個分離毒株親緣關(guān)系很近，同源性為98.3％～99.7％；5株陜西分離毒株與國內(nèi)其他省份的分離株的親緣關(guān)系較近，同源性為95.6％～99.