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1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文野生大豆耐鹽相關(guān)基因的克隆與序列分析姓名:張春寶申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):作物遺傳育種指導(dǎo)教師:王鳳義董英山20070620IsolationandSequenceAnalysisofSalt—toleranceRelatedGeneinWildSoybeanAbstractSaltsUessisoneofthemainfactorswhichaffectthegrowthandoutputofcropsItise
2、stimatedthatupto4x1059x108hectarelandWaSsalinizeal,whichismorethanthreetimestopresentagriculturalland,SOhowtoimprovecropssalttaleranceisbecomingmoleandmoreimportantCultivatedsoybeanoaonsfromwildsoybean,wildsoybeanhasgrea
3、tresistanceandisallimportantgermplasmreSOllreOsforcultivatedsoybeanbreedingTherefore,itisveryurgenttostudysalttolerancemechanismandisolateexcellentgenesfromwildsoybeanforcultivatedsoybeanimprovementTheprolineisanimportan
4、tosmolyteNotonlylowerplantsbutalsohighel“plantsCanaccumulatefreeprolineinresponset0osmoticstressesTheprolinesynthesisenzymefP5CS)isakeyenzymeintheprolinebiosynthesiswhichlimitsthesynthesisrateofProlineIthasimportantsigni
5、ficancetoresearchonP5CSWildsoybeanZYD00659WaSusedinthisstudyTwopairsofprimersweredesignedaccordingtotheconservedregiomofthePSCSfromotherplantinGenhankThegenewasamplifiedbyRTPCRfromthetotalRNAwhichWasextractedfromwildsoyb
6、eanundersaltStressin200mMNaCIByhomologousbasedcloningweisolatedacDNAsequenceinwild∞ybearlwith1569bpinlengthItencodes523aminoacidsPredictedbysoftwarethemolecularweightofthispoptideis56514kDaitsisoeleetriepointis675Thededu
7、cedproteincontainsNADPHbindingdomainGlu—kinasedomainGSAdehydmgenasodomainandfeedbackinhibitionsiteNCBIdalabaseConservedDomainSearchithasthewholeProAdomainnamedGsPSCSlUsethe&anlemethod,wealsoisolatedanothereDNAsequenceinw
8、ildsoybeanwith560bpinlengthItencodesabout186aminoacids。PredictedbysoftwarethemolecularweightofthispeptidejS20,186kDaitsisoelectricpointis473NCBIdatabaseConservedDomainSearchithasthepartialProAdomainnamedGsP3CS2Wel螂GsPSCS
9、2eDNAsequencedesignedapairofprimeramplifiedaDNAsequencebyPCRingenomieDNAThelengthofthesequenceis1374bp,containsfourintronsandfiveexttonsAndbet、vcenintronsandextronwhichhavetypicalGT/AGstructurenamedgGsPSCS2Weblastthesequ
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