p73基因在人肺癌中的表達(dá)及對(duì)其細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、肺癌是目前人類因癌癥死亡的最主要原因.雖然近年來化學(xué)治療、放射治療和外科治療手段不斷發(fā)展,但肺癌患者總的生存率仍然沒有明顯的改善,5年生存率不到15﹪.肺癌的發(fā)生和其他腫瘤一樣,其實(shí)質(zhì)是基因異常的結(jié)果,包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活.探討和闡明肺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)理,為治療肺癌開辟新的手段具有重要的意義.肺癌細(xì)胞株H1299(p53-null)和A549-(wtp53)對(duì)外源性p53基因治療有不同反應(yīng).該研究應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染、RT-P

2、CR、免疫組化、western蛋白免疫印跡、基因工程、流式細(xì)胞、TUNEL、克隆形成等技術(shù)探討外源性p73基因及其異構(gòu)體△Np73對(duì)不同p53基因狀態(tài)的肺癌細(xì)胞株細(xì)胞生物學(xué)行為及化療敏感性的影響,分析p73與p53基因的關(guān)系;并利用半定量RT-PCR方法對(duì)40例NSCLC癌組織及對(duì)應(yīng)遠(yuǎn)癌肺組織中△Np73轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平進(jìn)行分析.主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.外源野生型p73基因能夠有效抑制H1299和A549肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng),提示p73基因的

3、抑癌作用不受p53基因狀態(tài)的影響,能用于治療p53基因不能發(fā)揮作用的惡性腫瘤,這一作用的可能機(jī)制是p73基因治療能獨(dú)立啟動(dòng)不依賴于p53基因的細(xì)胞凋亡途徑.2.p73基因能增強(qiáng)p53基因治療敏感抵抗的腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷性化療藥物的敏感性,使肺癌細(xì)胞對(duì)DNA損傷性化療藥物如順鉑和阿霉素的敏感性顯著升高.為p73基因治療聯(lián)合化療提高非小細(xì)胞肺癌治療效果提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù).3.△Np73的過表達(dá)導(dǎo)致H1299和A549細(xì)胞惡性增殖能力提高,并能

4、增強(qiáng)肺癌細(xì)胞的化療耐藥性,提示△Np73在肺癌的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮癌基因的功能.△Np73使化療藥誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡明顯減少.4.△Np73的存在影響p53基因的抑癌作用,△Np73反義RNA無論在體外還是體內(nèi)均可抑制A549細(xì)胞的惡性增殖,說明△Np73是p53基因功能的負(fù)調(diào)節(jié)因子.為△Np73反義RNA的臨床應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).5.NSCLC患者癌組織中,△Np73 mRNA的表達(dá)明顯高于對(duì)應(yīng)遠(yuǎn)癌肺組織,并且△Np73基因的過表達(dá)與肺癌患者