p73基因在急性白血病的表達(dá)及臨床意義

1、p73基因在急性白血病的表達(dá)及臨床意義,學(xué)生：李茜汝導(dǎo)師：蘇麗萍 教授山西省腫瘤醫(yī)院血液科 2010.4,,研究方法,研究背景,白血?。╨eukemia）是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病。目前，白血病的確切病因尚不明了，但腫瘤的發(fā)生均與腫瘤相關(guān)基因的異常表達(dá)密切相關(guān)，異常表達(dá)的腫瘤相關(guān)基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)由于不適當(dāng)?shù)啬M正常蛋白的生長(zhǎng)作用方式及細(xì)胞生長(zhǎng)、分化紊亂，而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。如何提高白血病診斷及治療水平，提高患者生存質(zhì)量，一直

2、是醫(yī)生十分關(guān)注的問題。,研究背景,P53抑癌機(jī)制,研究背景,p73基因是1997年Kaghad等在篩選介導(dǎo)胰島素信號(hào)傳遞因子(IRS21)時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)的，定位于人類1號(hào)染色體1p36.33。測(cè)序發(fā)現(xiàn)其序列與p53基因有高度同源性。 1p36是多種人類腫瘤基因缺失熱點(diǎn)區(qū)域，且認(rèn)為該區(qū)存在多個(gè)抑癌基因。由于其特殊定位及其與p53基因結(jié)構(gòu)和功能的高度同源性，p73基因被認(rèn)為可能是抑癌基因。 但有學(xué)者提出p73基因在肝癌、結(jié)腸癌、膀胱

3、癌組織中表達(dá)明顯增高，其表達(dá)水平與腫瘤惡性程度明顯相關(guān)。而且p73基因在不同腫瘤中表達(dá)水平差異很大，顯示了抑癌基因和癌基因的雙重特性。,研究背景-p73的作用機(jī)制,癌基因作用,抑癌基因作用,cancer,,研究背景-相關(guān)腫瘤研究,p73,,,肺癌,,前列腺癌,在惡性腫瘤中，p73基因在不同類型細(xì)胞的腫瘤中有不同的生物學(xué)行為，,研究目的,檢測(cè)成人急性白血?。ˋL）患者p73基因mRNA的表達(dá)情況,從而探討p73基因與白血病發(fā)病、復(fù)發(fā)及預(yù)

4、后的關(guān)系，為成人AL的臨床治療提供更有意義的指導(dǎo)作用。,研究方法及實(shí)驗(yàn)技術(shù),選取2008年6月-2009年3月期間在山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院及山西省腫瘤醫(yī)院血液科住院的初治及復(fù)發(fā)或難治急性白血病患者100例，經(jīng)臨床及骨髓涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)檢查，按張之南主編《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》確診。 包括初發(fā)未治64例，復(fù)發(fā)或難治36例，按FAB分型，急性髓細(xì)胞白血病(AML)80例(M2 ,12例；M3 ,35例；M4 ,18例；M5 ,9例

5、；M6 ,6例)，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)20例。其中男60例，女40例，中位年齡40歲(9～65歲)。對(duì)照組為20例非白血病(NL)且骨髓象正常者。,研究方法及實(shí)驗(yàn)技術(shù),AML療效標(biāo)準(zhǔn),研究方法及實(shí)驗(yàn)技術(shù),瓊脂糖凝膠電泳,,計(jì)算p73 mRNA在AL細(xì)胞及不同細(xì)胞類型中表達(dá)的陽(yáng)性率及強(qiáng)度，結(jié)合臨床分型、治療效果及預(yù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,確診AL患者100例及正常對(duì)照者20例骨髓標(biāo)本2ml,隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；AMV逆轉(zhuǎn)錄酶

6、系合成,TRizol一步法提取總RNA,RT反轉(zhuǎn)錄,,,,,,研究方法及實(shí)驗(yàn)技術(shù),采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 對(duì)p73 mRNA在AL細(xì)胞及不同細(xì)胞類型中表達(dá)的陽(yáng)性病例組與正常對(duì)照組閾值進(jìn)行t檢驗(yàn)，不同類型AL陽(yáng)性率比較進(jìn)行X2檢驗(yàn)，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行單因素方差分析。 P<0.05時(shí)說(shuō)明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論,M 1 2 3 4 5

7、 6 M,注：M（marker）；1（陰性對(duì)照）；2~6（AL中p73 mRNA的表達(dá)）； p73擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為390bp圖3 RT-PCR檢測(cè)p73 mRNA表達(dá),,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論,,表2 不同類型AL及對(duì)照組細(xì)胞中p73 mRNA的表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論,實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論,AML細(xì)胞p73 mRNA表達(dá)陽(yáng)性率56.3%,ALL細(xì)胞p73 mRNA表達(dá)陽(yáng)性率20.0%,兩組差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,1. p73

8、基因的失表達(dá)在ALL中是高頻率發(fā)生事件，在其形成中起著抑癌基因作用。 在AML中，p73基因表現(xiàn)為過度表達(dá)，起著癌基因樣作用。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論,2.分別比較ALL及AML患者一般預(yù)后組與不良預(yù)后組p73 mRNA表達(dá)率及強(qiáng)度的差異，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) 。,結(jié) 論,p73基因在不同類型白血病發(fā)病及預(yù)后中起的作用不同： p73基因在ALL患者初診時(shí)有較高的陰性表達(dá)率，并在病情緩解后轉(zhuǎn)為陽(yáng)性表達(dá)，起著抑癌基因樣作

9、用；與之相反，在AML患者中p73基因高水平表達(dá)，且其表達(dá)水平隨病情的緩解而降低，表現(xiàn)為癌基因樣作用。,結(jié) 論,p73基因的表達(dá)在急性白血病的發(fā)病中均起著重要作用，且多與較差的預(yù)后特征、對(duì)化療反應(yīng)差、早期治療失敗、較短的生存期有關(guān)。通過動(dòng)態(tài)檢測(cè)AL患者p73基因的表達(dá)情況，從而盡早決定是否需要使用更有效的治療手段(如骨髓移植BMT)或針對(duì)p73基因進(jìn)行基因治療，有希望提高急性白血病的治愈率。,[1]李陜區(qū),崔大祥,劉變英等.結(jié)腸癌中

10、P73基因改變的意義[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000; 21:314-316.[2] Liu M,Taketani T,Li R ,et al.Loss of p73 gene expression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylation[J].Leuk Res,2001,25(6):443.[3] Roman Gomez J,Jime

11、nez-Velasco A,Castillejo JA,et al.Promoter hypermethylation of Related genes: a strong independent prognostic factor in acute lymphoblastic leukemia[J]. Blood,2004,104(8):2492-2498.[4] Bell HS,Dufes C,O′Prey J,et al.A

12、p53-derived apoptotic peptide derepresses p73 to cause tumor regression in vivo.[J].J Clin Invest,2007,117(4):1008-1018.[5] Chi SG,Chang SG,Lee SJ,et al.Elevated and biallelic expression of p73 is associated with progre

13、ssion of human bladder cancer[J].Cancer Res,1999;59:2791-2793.[6] Mendrysa,S. M.,K. A. O’Leary, M. K. McElwee, et al. Tumor suppression and normal aging in mice with constitutively high p53 activity[J].Genes Dev.2006.20

14、:16-21.[7]何勇,童玲,范士志,等.p73基因與人類腫瘤的研究進(jìn)展[J].腫瘤防治雜志,2005,12 (7):551-554.,參考文獻(xiàn),[8]劉明利,李蓉生,林泰秀,等. 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患者p73基因表達(dá)的研究[J].中華血液學(xué)雜志,2000,23(5):242.[9]殷小成,曹勵(lì)之. p73基因失活在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病和預(yù)后的意義[J].實(shí)用癌癥雜志,2003,18(3):240-244.[10] M

15、ingli liu.Taketani Loss of p73 gene exp ression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylation[J].Leukemia Research,2000,25(6):441-447.[11]殷小成,曹勵(lì)之. p73mRNA在急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華兒科雜志,2004,42(7)

16、:529.[12] Corn PG,Kuerbiitz SI,Van NoeselMM,et al.Transcriptioral silencing of yhe p73 gene in acute lymphoblastic leukemia and Burkitt’s lymphoma is associated with 5’CpG island methylation[J].Cancer Res,1999,59(14):33