SOCS3基因在肺癌組織中的表達分析及其對肺癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf

1、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signaltransducersandactivatorsoftranscription，STAT)介導(dǎo)的信號途徑，在細(xì)胞因子介導(dǎo)的多種生理及病理過程中起著重要作用。近年來，STAT蛋白在多種腫瘤中均被發(fā)現(xiàn)，其中，STAT3與腫瘤的關(guān)系尤為密切，被認(rèn)為是一種原癌基因。細(xì)胞信號負(fù)調(diào)控因子家族(suppressorsofcytokinesignaling，SOCS)是1997年以來被發(fā)現(xiàn)的STAT信號通路的負(fù)調(diào)控因

2、子。SOCS家族包括CIS和SOCS1～7共8個成員，目前對SOCS3基因了解的較為清楚，其啟動子上含有STAT3的結(jié)合位點，活化的STAT3可作為核轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)SOCS3基因的表達，其表達產(chǎn)物通過抑制STAT3蛋白的活性，從而維持細(xì)胞的正常生長。已證實肺癌組織存在STAT3蛋白的持續(xù)激活，但關(guān)于SOCS3基因在肺癌組織中的表達及作用機制尚未見報道。 本研究通過觀察細(xì)胞因子信號負(fù)調(diào)控因子SOCS3和STAT3基因在人肺癌組織中的

3、表達狀況，并將SOCS3基因真核表達載體轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞內(nèi)，檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖及原癌基因的表達變化，以探討SOCS3基因?qū)Ψ蜗侔┘?xì)胞株A549中STAT3介導(dǎo)的信號通路及細(xì)胞增殖的調(diào)控機制，將有可能為腫瘤的基因治療提供一個新的靶點。 研究內(nèi)容：1、RT-PCR檢測肺癌組織和正常肺組織中SOCS3、STAT3mRNA表達。 2、應(yīng)用lipofectmine2000將SOCS3表達載體和篩選載體轉(zhuǎn)染入A549中，G418篩

4、選。RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)法分析SOCS3表達變化。 3、半定量RT-PCR和Westernblot檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞STAT3mRNA表達和STAT3蛋白活性變化。 4、流式細(xì)胞儀、3H-TdR摻入實驗、MTT檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖變化。 5、半定量RT-PCR檢測細(xì)胞癌基因c-Myc、c-Fos、c-JunmRNA表達變化。 結(jié)果：1、RT-PCR未檢測到肺癌組織和正常肺組織中SOCS3mRNA表達；

5、肺癌組織中STAT3mRNA表達顯著高于正常肺組織。 2、共轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)G418(500μg/ml)篩選后獲得陽性細(xì)胞克??；RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)法證實SOCS3基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中SOCS3mRNA和蛋白水平均有強烈表達。 3、半定量RT-PCR結(jié)果顯示SOCS3基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞STAT3mRNA表達量與對照組細(xì)胞相比無顯著差異；Westernblot結(jié)果顯示SOCS3基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞pTyr705-STAT3表達量顯著低于

6、對照組細(xì)胞。 4、與對照組細(xì)胞相比，SOCS3基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞生長減慢；3H-TdR摻入率下降，G0/G1期細(xì)胞比例增加、S+G2/M期細(xì)胞比例減少。 5、半定量RT-PCR結(jié)果顯示SOCS3基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞c-Myc，c-Fos，c-JunmRNA表達量顯著低于對照組細(xì)胞。 結(jié)論：1、人肺癌組織及人肺腺癌細(xì)胞株A549中未檢測到SOCS3基因表達。人肺癌組織STAT3基因表達顯著高于正常肺組織。 2、利用脂