人乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病中HPV16 E2、E6、E7基因突變及E6、E7抗原表達的研究.pdf

1、【目的】
　　研究人乳頭瘤病毒（HPV）相關疾病中HPV亞型分布，HPV16的E2、E6、E7基因突變和E6、E7抗原表達，及其與疾病臨床特征間的相關性。
　　【方法】
　　1、標本收集：收集廈門大學附屬中山醫(yī)院病理科2007~2013年 HPV相關疾病的庫存石蠟包埋組織共91例，包括31例尖銳濕疣（CA）、11例2級宮頸上皮內瘤變（CIN2）、23例3級宮頸上皮內瘤變（CIN3）、3例鮑溫樣丘疹?。˙P）、9例鮑溫病

2、（BD）和14例派吉特病（PD）。
　　2、從福爾馬林固定-石蠟包埋組織中提取HPV基因組DNA，用PCR-膜雜交法檢測HPV DNA并做HPV分型。
　　3、應用DNA測序法測定HPV16的E2、E6和E7基因序列，并應用BLAST軟件將測序結果與基因庫中野生型HPV16序列（GeneBank NC001526）比對，以分析HPV16的E2、E6和E7基因突變。
　　4、應用免疫組織化學S-P法檢測HPV16的E6和

3、E7抗原表達。
　　5、分析HPV相關疾病中HPV亞型分布、HPV16的E2、E6和E7基因突變、HPV16的E6和E7抗原表達與疾病臨床特征（性別、年齡、部位、組織病理特征等）間相關性。
　　6、統(tǒng)計學分析：HPV DNA檢出率差異比較采用x2檢驗，設p<0.05為差異具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　【結果】
　　1、HPV分型：91例標本中檢出10個HPV亞型，其中14/31例CA（45.2％）、5/11例CIN2

4、（45.5%）、14/23例CIN3（60.9%）和1/9例BD（11.1%）中檢出HR-HPV DNA，3/31例CA（9.7%）、2/11例CIN2（18.2%）、8/23例CIN3（34.8%）和1/9例BD（11.1%）中檢出HPV16 DNA，但14例PD和3例BP中未檢出HPV DNA，所有標本中都未檢出HPV18 DNA。男性CA患者檢出HPV均為LR-HPV，但女性CA患者檢出LR-HPV和HR-HPV混合感染。女性CA

5、患者HR-HPV檢出部位主要為宮頸，且年齡>50歲組HR-HPV檢出率高于年齡<50歲組，但差異無統(tǒng)計學意義。CIN3患者HPV、HR-HPV和HPV16 DNA檢出率均略高于CIN2，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　2、HPV16的E2、E6和E7基因突變：1例CA和1例CIN3中檢出HPV16的E2基因置換突變，2例CIN3中檢出HPV16的E2、E6和E7基因置換突變。HPV16的E2基因中共檢出10個堿基置換突變：G2827A（

6、Asp→Asn）、C3158A（Thr→Lys）、G3248A（Arg→Gln）、T3383C（Ile→Thr）、C3409T（Pro→Ser）、G3448A（Glu→Lys）、C3683A（Thr→Lys）和C3786A（Asp→Gln）為錯義突變；HPV16 E6基因中共檢出5個堿基置換突變，其中G94A置換突變位于起始密碼子之前導致一個調控氨基酸改變，G132T（Arg→Ile）、T178A（Asp→Glu）、T178G（Asp→

7、Glu）和C278G（Pro→Ala）為錯義突變，T178A（Asp→Glu）和T178G（Asp→Glu）突變后編碼的氨基酸相同；HPV16的E7基因中共檢出4個堿基置換突變，其中A647G（Asn→Ser）為錯義突變。
　　3、HPV16的E6和E7抗原表達：14例HPV16 DNA陽性標本中1例BD、1例CA、1例CIN2和3例CIN3呈HPV16 E6抗原陽性，1例BD和3例CIN3呈HPV16 E7抗原陽性。
　　

8、【結論】
　　1、女性CA中存在LR-HPV和HR-HPV混合感染，HR-HPV檢出部位主要為宮頸。
　　2、CIN中檢出的HR-HPV主要為HPV16。
　　3、發(fā)現(xiàn)CA中存在HPV16 E2基因突變。
　　4、HPV16 E2、E6和E7基因置換突變可能與CA、CIN2和CIN3的發(fā)生和進展有關。
　　5、HPV16 E7抗原只在癌前病變或原位癌中檢出，因此可能作為疾病惡性指標之一。
　　6、PD