農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻轉(zhuǎn)ICE1基因的研究.pdf

1、擬南芥.ICEl基因是重要冷誘導(dǎo)調(diào)節(jié)基因。ICEl基因在低溫下被激活，刺激CBF/DREB基因表達(dá)，CBF/DREB轉(zhuǎn)錄因子再結(jié)合在COR基因啟動(dòng)子的CRT/DRE(CCGAC)元件上，與其它蛋白(RNA聚合酶Ⅱ等)相互作用，調(diào)控下游一系列冷誘導(dǎo)基因(COR)和在植物寒冷適應(yīng)中起作用的其它基因的表達(dá)，提高植物抗寒性。 目前，水稻中己發(fā)現(xiàn)一些與擬南芥CBF/DREB同源的OsDREB調(diào)控基因及一些冷誘基因(COR)，如果將冷誘導(dǎo)基

2、因ICEll在水稻體內(nèi)強(qiáng)烈表達(dá)或誘導(dǎo)表達(dá)，就有可能培養(yǎng)出耐寒的水稻品種，我們利用實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)克隆的.ICEl基因，構(gòu)建組成型啟動(dòng)子CaMV35S和擬南芥冷誘導(dǎo)啟動(dòng)子rd29A調(diào)控ICEl基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體：pCAMBIAl300-35S-ICEl-polyA和pCAMBIAl300-rd29A-ICEl-polyA，建立了墾鑒稻10號(hào)成熟胚愈傷組織再生體系，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法分別用兩種植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化墾鑒稻10號(hào)成熟胚愈傷組織，

3、希望獲得耐寒的水稻品種。實(shí)驗(yàn)共得到擬轉(zhuǎn)35S-ICEl-polyA的潮霉素抗性植株76株，移栽成活49株，經(jīng).PCR檢測(cè)17株呈陽性，個(gè)別植株有矮化現(xiàn)象發(fā)生：得到擬轉(zhuǎn)rd29A-ICEl-polyA的潮霉素抗性植株33株，移栽成活20株，經(jīng)PCR檢測(cè)4株呈陽性，植株沒有矮化現(xiàn)象發(fā)生。部分PCR陽性的轉(zhuǎn)35S-ICEl-polyA植株T<,0>代經(jīng)Southern雜交檢測(cè)呈陽性。對(duì)Southern雜交呈陽性的T<,0>代植株自交的種子(T

4、<,1>代)進(jìn)行潮霉素抗性測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明，與未轉(zhuǎn)基因水稻相比，T<,1>代表現(xiàn)出對(duì)潮霉素較高的抗性，經(jīng)卡方(X<'2>)適合性檢驗(yàn)表明，5個(gè)T<,0>代株系自交形成的種子表現(xiàn)出3：1分離方式，占71％，表明外源基因在轉(zhuǎn)基因植株的染色體上是單拷貝插入的；有2個(gè)T<,0>代株系自交形成的種子沒有表現(xiàn)出3：1分離方式，可能是外源基因以多拷貝、多位點(diǎn)的方式插入水稻染色體上。抗寒能力檢測(cè)結(jié)果表明，在相同低溫脅迫條件下T<,0>-11和T<,0