WISP-1-研究乙肝誘發(fā)肝癌的新途徑.pdf

1、目的:通過免疫組化和Western blot等方法，觀察由乙肝病毒X蛋白（HBX）引起的HepG2細(xì)胞內(nèi)Wnt誘導(dǎo)的分泌型蛋白1（以下簡稱為WISP-1）的變化，探索乙肝病毒導(dǎo)致肝癌的新的機(jī)制。
　　 方法:（1）分別收集肝癌，癌旁，及正常肝組織標(biāo)本。采用免疫組化的方法檢測WISP-1在這些組織內(nèi)的表達(dá)及差異。（2）采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000為媒介，分別將pc-DNA3.1(+)和pc-DNA3.1(+)-HB

2、X兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，經(jīng)過G418長期篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株G0和Gx。（3）采用PCR技術(shù)檢測G0和Gx中WISP-1mRNA的表達(dá)水平及差異。（4）采用Western blot從蛋白水平檢測G0和Gx中WISP-1的表達(dá)水平及差異。
　　 結(jié)果:（1）免疫組化結(jié)果顯示，肝癌組織中WISP-1的陽性表達(dá)率高于癌旁組織及正常肝組織，結(jié)果經(jīng)X2檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示W(wǎng)ISP-1在肝癌組織中高表達(dá)。（2）經(jīng)過G418

3、穩(wěn)定篩選一月后，成功建立能夠穩(wěn)定分泌HBX蛋白的Gx細(xì)胞系及相應(yīng)的空轉(zhuǎn)細(xì)胞系G0。（3）Western blot鑒定Gx和G0轉(zhuǎn)染成功。且Gx細(xì)胞能夠表達(dá)HBX蛋白。（4）PCR結(jié)果顯示W(wǎng)ISP-1 mRNA在Gx中的表達(dá)量高于G0。（5）Western blot結(jié)果顯示W(wǎng)ISP-1蛋白在Gx中的表達(dá)量高于G0。
　　 結(jié)論:WISP-1在肝癌組織中高表達(dá)。乙肝病毒感染肝細(xì)胞后，其X蛋白可通過上調(diào)WISP-1的表達(dá)水平，進(jìn)而引起