廣藿香內(nèi)生真菌多樣性及其在青枯病生物防治中的作用.pdf

1、目的：廣藿香[Pogostemon cablin(Blanco) Benth]具芳香化濕、和胃止嘔、祛暑解表的功效，是廣東道地藥材，著名的“十大南藥”之一，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)廣藿香的需求量極大。而由青枯菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的青枯病是廣藿香種植過(guò)程中危害最為嚴(yán)重的系統(tǒng)性病害，嚴(yán)重威脅廣藿香產(chǎn)業(yè)的生存與發(fā)展。因此，尋找新的安全有效的青枯病防治方法對(duì)于推廣廣藿香的種植、解決廣藿香資源緊缺、發(fā)展廣藿香產(chǎn)業(yè)具有重要

2、的意義。植物內(nèi)生真菌蘊(yùn)含的活性物質(zhì)資源十分豐富，已成篩選新化合物和新藥的重要資源庫(kù)，此外內(nèi)生真菌與宿主植物在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中已建立密切的聯(lián)系，并能通過(guò)多種機(jī)制提高植物的抗病害能力，因而其在植物病害生物防治中也顯示出良好的應(yīng)用前景。目前對(duì)廣藿香內(nèi)生真菌的生物多樣性缺乏全面的認(rèn)識(shí)，關(guān)于其在廣藿香青枯病防治中的潛在作用也尚未涉及。本論文旨在系統(tǒng)分析廣藿香內(nèi)生真菌的類(lèi)群結(jié)構(gòu)及多樣性，并從中篩選出對(duì)廣藿香青枯病具有生防潛力的活性菌株，為全面挖掘廣

3、藿香內(nèi)生真菌的藥用資源以及構(gòu)建“內(nèi)生真菌-廣藿香”青枯病生防系統(tǒng)提供前期基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.傳統(tǒng)培養(yǎng)法分析廣藿香可培養(yǎng)內(nèi)生真菌的多樣性
　　采用組織塊分離法從廣藿香健康植株的根、莖、葉中分離內(nèi)生真菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)和基于rDNA-ITS序列分析鑒定方法分析廣藿香不同部位可培養(yǎng)內(nèi)生真菌的類(lèi)群結(jié)構(gòu)及多樣性。
　　2.高通量測(cè)序方法全面分析廣藿香內(nèi)生真菌的多樣性
　　分別提取廣藿香根、莖、葉樣品的總DNA，用

4、ITS5-1737F, ITS2-2043R引物對(duì)擴(kuò)增真菌ITS區(qū)序列，Illumina Miseq高通量測(cè)序后分析比較廣藿香不同部位內(nèi)生真菌的類(lèi)群分布和多樣性。
　　3.篩選對(duì)廣藿香青枯病具有生防潛力的內(nèi)生真菌
　　通過(guò)雙層平板拮抗試驗(yàn)分析廣藿香內(nèi)生真菌對(duì)青枯菌的體外拮抗活性；進(jìn)一步通過(guò)盆栽試驗(yàn)分析驗(yàn)證活性菌株對(duì)廣藿香青枯病的生防效果。
　　結(jié)果：
　　1.從廣藿香中共分離獲得313株內(nèi)生真菌，隸屬于30個(gè)屬，

5、其中鏈格孢屬(占28.75％)、擬莖點(diǎn)霉屬(占23.00%)和炭疽菌屬(11.82%)為優(yōu)勢(shì)類(lèi)群，此外還分離到炭皮菌屬、彎孢聚殼屬、Gibellulopsis、新薩托菌屬、葡萄座腔菌屬、籃狀菌屬等較為少見(jiàn)的類(lèi)群。莖、葉內(nèi)生真菌的定殖率和分離率明顯高于根，而根部多樣性指數(shù)為2.643，要高于莖(2.002)和葉(1.974)。
　　2.經(jīng)過(guò)高通量測(cè)序后，廣藿香3個(gè)部位共獲得41188條有效序列，1305個(gè)OTUs分類(lèi)，檢測(cè)到子囊菌門(mén)

6、和擔(dān)子菌門(mén)2個(gè)門(mén)類(lèi)，其中根的優(yōu)勢(shì)菌屬為阿太菌屬(11.13%)和漆斑菌屬(10.19%)，莖的優(yōu)勢(shì)菌屬為曲霉屬(5.58%)，葉的優(yōu)勢(shì)菌屬為曲霉屬(0.64%)。廣藿香莖部?jī)?nèi)生真菌的物種豐度和總多樣性菌最高，根部次之，葉部最低。
　　3.從分離到的內(nèi)生真菌中篩選到16株對(duì)青枯菌有抑制活性的菌株，其中菌株GHXR07、GHXR27、GHXR29的體外抑菌效果較為顯著，分別被鑒定為T(mén)alaromyces sp.、Myrothecium