分娩發(fā)動前后孕婦蛻膜及外周血中NK、NKT細胞生物學特性的研究.pdf

1、研究背景：正常的妊娠，是母體免疫系統(tǒng)對帶有父源抗原的胎兒產生的一種免疫耐受現象，這種耐受是由多種因素之間相互制約、相互調節(jié)產生的。近年生殖免疫學者對自然殺傷細胞(NK cells)和自然殺傷T細胞(NKT cells)在其中的作用給予更多關注。NK細胞、NKT細胞在妊娠期產生Th2的免疫平衡，當這種平衡被打破，即產生各種病理妊娠，并可能誘導產程的發(fā)動。人類分娩發(fā)動的機理至今仍是個迷，目前人們轉向組織水平、免疫水平找尋分娩動因。母-胎界面

2、免疫微環(huán)境由蛻膜中的免疫活性細胞及其分泌的細胞因子組成，母體的免疫調節(jié)系統(tǒng)包括抗原特異T細胞、調節(jié)性T細胞、NK細胞、γδT細胞、NKT細胞和細CTL細胞等，它們共同參與調節(jié)Th1/Th2平衡構成妊娠期Th2偏倚的免疫微環(huán)境，使母體對胎兒產生特異性免疫耐受以維持妊娠。已有的研究證實，NK細胞大量存在于妊娠早期蛻膜并與胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞密切接觸，在妊娠中發(fā)揮重要作用(其中70％左右為CD56brightCD16+NK細胞)，而在妊娠晚期則明

3、顯減少。最近大量的研究發(fā)現，NKT細胞也參與了母胎耐受的形成。在人妊娠早期的蛻膜和外周血中存在NKT細胞的表達，人蛻膜組織富集TCRαβ+CDl61+非恒定型NKT細胞(也稱為II型NKT細胞，non-iNKT cell)并表現了顯著的Th2型偏移(產生IL-4)，為機體提供一個Th2型的微環(huán)境，并發(fā)現該群NKT細胞具有免疫抑制作用。提示蛻膜組織中的非恒定型NKT細胞可能通過提供一個Th2型的微環(huán)境從而抑制胎兒排斥和維持正常的妊娠。本研

4、究采用流式細胞熒光測定技術檢測孕足月分娩發(fā)動前后外周血和蛻膜組織單個核細胞中NK細胞、NKT細胞構成及其表面NKG2D受體和NKG2A受體表達情況的變化，并進一步檢測外周血單個核細胞中Th1/Th2平衡的變化及NK細胞、NKT細胞分泌Th1、Th2型細胞因子的情況，探討其與分娩發(fā)動的關系，揭示NK細胞及NKT細胞在分娩發(fā)動中的作用。并進一步研究母胎界面趨化因子CXCR4的表達情況，試圖探討其與分娩發(fā)動前后NK細胞、NKT細胞重新分布之間

5、的關系。研究外周血及蛻膜組織中NK細胞、NKT細胞的功能狀態(tài)與分娩發(fā)動的關系，無疑從一個全新的角度詮釋分娩這一生理現象，也為揭示妊娠時限異常疾病的發(fā)生機制及最終有效防治提供新思路，并為生殖免疫的發(fā)展提供新的理論依據。
　　 目的：檢測分娩發(fā)動前后蛻膜及外周血中NK細胞及NKT細胞的含量、表型、Th1/Th2型細胞因子表達方面的變化，探討NK細胞、NKT細胞獨特的表型、功能與分娩發(fā)動之間的重要聯(lián)系。檢測母胎界面趨化因子CXCR4表

6、達的變化，以發(fā)現其與NK細胞、NKT細胞在產程發(fā)動后在母胎界面重新分布及功能變化的聯(lián)系。探討母胎免疫平衡在分娩發(fā)動中的作用。
　　 方法：⑴收取正常晚孕分娩組(實驗組，32例)和正常晚孕剖宮產組(對照組，34例)壁蛻膜組織及同一人外周血，機械研磨法聯(lián)合密度梯度離心法分離出蛻膜單個核細胞，單純密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞，流式細胞術檢測蛻膜及外周血中NK細胞、NKT細胞的含量及表型。⑵流式細胞術檢測正常晚孕分娩組和剖宮產組

7、外周血中Th細胞平衡的變化及NK細胞、NKT細胞內Th1/Th2型細胞因子IFN-γ和IL-4的表達。⑶收取正常晚孕自然分娩及剖宮產孕婦壁蛻膜及胎盤組織(各6例),RT-PCR方法檢測胎盤及壁蛻膜中CXCR4的表達情況。
　　 結果：①與剖宮產組相比，分娩組蛻膜中NK細胞及NKT細胞的構成低于剖宮產組,外周血中NK細胞及NKT細胞構成高于剖宮產組(P＜0.01），兩組蛻膜中NK細胞構成均高于外周血(P＜0.01)。②蛻膜單個核細

8、胞中，分娩組CD56+NKG2A+細胞、CD56+NKG2D+細胞、NK細胞表面NKG2A、NKG2D受體表達均低于剖宮產組(P＜0.05)。兩組中NKT細胞表面NKG2A、NKG2D受體表達無顯著差異(P＞0.05)。③外周血單個核細胞中，分娩組CD56+NKG2A+細胞構成、NK細胞表面NKG2A受體表達低于剖宮產組,(P＜0.05)。CD56+NKG2D+細胞構成、NK細胞表面NKG2D的表達及NKT細胞表面NKG2A/NKG2D

9、受體的表達高于剖宮產組,(P＜0.01)。④外周血單個核細胞中，分娩組外周血CD3+T細胞中Th1細胞含量高于剖宮產組(P＜0.01），Th2細胞含量與剖宮產組無差異(P＞0.05）。分娩組NKT細胞、NK細胞分泌IFN-γ的能力高于剖宮產組。分娩組NKT細胞分泌IL-4的能力高于剖宮產組，NK細胞分泌IL-4的能力與剖宮產組無顯著差異。⑤兩組胎盤、胎膜均有CXCR4表達，剖宮產組胎盤、胎膜上CXCR4表達相對高于分娩組。