妊娠期肝內膽汁淤積癥患者蛻膜及外周血中NK細胞生物學特性的研究.pdf

1、研究背景：妊娠期肝內膽汁淤積癥(ICP)是妊娠晚期特有的并發(fā)癥，以全身皮膚瘙癢、肝功能異常、伴有不同程度的黃疸為特征，其主要危及胎兒，易引起早產(chǎn)、胎兒窘迫、死胎、死產(chǎn)等。目前對于ICP確切的發(fā)病原因，以及宮內缺氧的機制尚未完全明確，迫切需要明確闡述ICP的發(fā)病原因，才有可能建立有效的預防、治療措施。 已有研究表明該病的發(fā)生與妊娠期母體免疫功能紊亂有關。近年來國內外提出了母胎界面這一概念，其核心內容是母胎界面由母體的子宮蛻膜和胎兒

2、滋養(yǎng)層共同構成，母胎界面內的多種細胞成份及其分泌的細胞因子構成了特殊的母胎界面免疫微環(huán)境，在保護胎兒生長發(fā)育、免受母體的免疫排斥中起重要作用。在人類妊娠過程(尤其早期妊娠)中，NK細胞是蛻膜中最豐富的淋巴細胞，它與胚胎滋養(yǎng)層細胞直接接觸，是唯一粘附于滋養(yǎng)層細胞表面的子宮淋巴細胞。dNK細胞主要分布于母體與胚胎接觸的蛻膜，是母體直接識別胎兒抗原的免疫細胞，它的獨特的表型及功能不但能維持母胎界面的免疫耐受，還能分泌一系列細胞因子促進蛻膜血管

3、重建及Th1/Th2平衡網(wǎng)絡的維持。若dNK細胞的數(shù)量及功能失調則可能誘發(fā)病理妊娠。 本課題研究ICP患者蛻膜及外周血中NK細胞的含量、表型、功能狀態(tài)的變化，研究ICP患者蛻膜及外周血中NK細胞的Th1、Th2型細胞因子的分泌情況是否同時出現(xiàn)在局部免疫與系統(tǒng)免疫，為進一步研究母胎免疫耐受的形成機制、ICP患者母胎界面免疫微環(huán)境變化的細胞學及分子生物學機制提供良好的實驗基礎。探討ICP患者全身系統(tǒng)與母胎界面局部免疫微環(huán)境變化的關系

4、，無疑為ICP的發(fā)病機制提供新的解釋。 目的： 檢測ICP患者蛻膜及外周血中NK細胞的含量、表型、Th1/Th2型細胞因子表達、殺傷功能方面的變化，探討ICP患者蛻膜及外周血中NK細胞獨特的表型、功能及其與滋養(yǎng)細胞的相互識別關系在系統(tǒng)免疫與母胎界面免疫耐受之間的重要聯(lián)系。 方法： 1)收取重度ICP患者(實驗組，15例)和正常晚孕(對照組，15例)壁蛻膜組織及同一人外周血，機械研磨法聯(lián)合密度梯度離心法分離

5、出蛻膜單個核細胞，單純密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞，流式細胞術檢測蛻膜及外周血中NK細胞的含量及表型。 2)收集重度ICP患者和正常晚孕胎盤組織各6例，RT-PCR技術檢測兩組胎盤滋養(yǎng)層中NKG2A的配體HLA-G，HLA-E和NKG2D的配體MICA mRNA的表達情況。 3)ELISA法檢測ICP組和正常晚孕組壁蛻膜及外周血單個核細胞上清中IFN-γ和IL-4的表達 4)流式細胞術檢測ICP組和正常晚

6、孕組壁蛻膜及外周血中NK細胞內Th1/Th2型細胞因子IFN-γ和IL-4的表達。 5)LDH法分別測定蛻膜及外周血中單個核細胞對NK細胞敏感性靶細胞K562的殺傷活性。 結果： 1)外周血中的NK細胞是以CD56+CDl6+為主，蛻膜中的NK細胞是以CD56+CDl6-為主。ICP組外周血中的NK細胞含量明顯高于對照組外周血中的NK細胞含量(P<0.05)，ICP組蛻膜中NK細胞含量明顯高于對照組蛻膜中的NK細

7、胞含量(P<0.05)。ICP組外周血中CD3-CD56+細胞、CD56+CDl6-細胞、CD56+CDl6+細胞、CD56+NKG2D+細胞含量均顯著升高(P<0.05)，而CD56+NKG2A+細胞細胞含量無顯著變化(P>0.05)。ICP組蛻膜中CD3-CD56+細胞、CD56+CDl6-細胞、CD56+CDl6+細胞、CD56+NKG2D+細胞含量均顯著升高(P<0.05)，而CD56+NKG2A+細胞含量無顯著變化(P>0.0

8、5)。 2)與對照組相比，ICP組蛻膜NK細胞高表達NKG2受體家族NKG2A和NKG2D，但在兩組滋養(yǎng)層中檢測到NKG2A的配體HLA-G和H1A-E，而未檢測到NKG2D的配體MICA，而且沒有差別。 3)與對照組相比，ICP患者外周血及蛻膜單個核細胞培養(yǎng)上清中INF-γ含量均顯著增高(P<0.05)，而IL-4含量無顯著變化(P>0.05)。 4)與對照組相比，ICP患者dNK及pNK細胞內Th1/Th2型

9、細胞因子IFN-γ和IL-4的表達均明顯增高(P<0.05)。 5)在一定效靶比情況下，ICP組蛻膜及外周血單個核細胞對NK細胞敏感性靶細胞K562的殺傷活性明顯高于對照組蛻膜及外周血單個核細胞。 結論： ICP組外周血及蛻膜組織中NK細胞在含量、表型、Th1/Th2細胞因子表達及殺傷功能方面均與正常晚孕對照組存在差異，并與滋養(yǎng)層細胞之間有密切聯(lián)系。異常的免疫應答不僅出現(xiàn)在ICP患者的全身系統(tǒng)，而且突出表現(xiàn)在母胎