犬頸動(dòng)脈狹窄支架置入后新生內(nèi)膜中PTX3的表達(dá)及法舒地爾的干預(yù)作用.pdf

1、背景:支架內(nèi)再狹窄是支架置入后血管壁受牽張和損傷引起的以?xún)?nèi)膜增生為主,以炎癥性愈合反應(yīng)為特征的病理過(guò)程。炎癥細(xì)胞及炎癥因子在支架再狹窄中起了重要作用,有效抑制炎性細(xì)胞的增殖和減少相關(guān)因子的表達(dá)可能是防治支架再狹窄的最佳途徑之一。
　　目的:探討犬頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄支架成形術(shù)后新生內(nèi)膜中正五聚體蛋白3(Pentraxin3,PTX3)的表達(dá)情況及法舒地爾對(duì)其的干預(yù)機(jī)制。
　　方法:1、選取健康雄性比格犬19只,適應(yīng)性普通飼料喂

2、養(yǎng)1周。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組為對(duì)照組(n=4)、造模組(n=15),造模組動(dòng)物在麻醉下行單側(cè)頸總動(dòng)脈氮?dú)飧稍锝Y(jié)合球囊擴(kuò)張術(shù)建立頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型,對(duì)照組僅分離暴露血管,不進(jìn)行損傷。術(shù)后高脂飼料喂養(yǎng)至頸動(dòng)脈彩超與動(dòng)脈血管造影確定模型建立的成功。2、隨機(jī)選取4只健康比格犬為對(duì)照組(A組,n=4),經(jīng)前期頸動(dòng)脈粥樣硬化造模犬8只,分為支架組(B組,n=4)、支架+藥物干預(yù)組(C組,n=4)。造影后將8枚金屬裸支架分別置入B、C組一側(cè)頸動(dòng)脈。

3、C組支架置入后靜脈輸注法舒地爾進(jìn)行干預(yù),A、B組輸注生理鹽水進(jìn)行對(duì)照。術(shù)后普通飼料喂養(yǎng)8周,后復(fù)查血管造影,觀察支架后血管狹窄情況。造影結(jié)束后,獲取目標(biāo)血管,行HE染色及彈力纖維染色觀察病理形態(tài)學(xué)變化,免疫組化染色分析增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、巨噬細(xì)胞標(biāo)記因子(CD68)、PTX3表達(dá)情況,RT-PCR技術(shù)和Western-blot法分別測(cè)定PTX3mRNA及蛋白表達(dá)情況。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以xˉ±s表示

4、,組間比較用t檢驗(yàn),多組均值比較用單因素方差分析(one-wayANOVA),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、造模后4周與8周彩超結(jié)果顯示:8周后造模組內(nèi)膜中層明顯增厚(IMT)、血流阻力(RI)增大,收縮期血流峰值速度(PSV)、舒張末期血流速度(EDV)、血管內(nèi)徑減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血管造影結(jié)果顯示:造模組狹窄直徑百分比(D-sten％)及狹窄面積百分比(A-sten%)均大于對(duì)照組,差異

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2、支架置積百分比均大于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),C組狹窄百分比大于A組,B組狹窄百分比大于C組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。入后8周血管造影結(jié)果示:B組狹窄直徑百分比、狹窄面
　　3、病理形態(tài)學(xué)觀察:支架置入后8周,A組頸總動(dòng)脈內(nèi)膜光滑,為單層內(nèi)皮細(xì)胞,中膜以平滑肌細(xì)胞為主,呈長(zhǎng)形或橢圓形,外膜為結(jié)締組織,無(wú)新生血管,管腔呈較規(guī)整圓形。B、C組頸動(dòng)脈內(nèi)膜不平整,細(xì)胞排

6、列紊亂,可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞及增生的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞,新內(nèi)膜形成。中層平滑肌細(xì)胞相對(duì)減少,纖維組織增生。細(xì)胞外基質(zhì)成分大量堆積,血管腔狹窄。B、C組新生內(nèi)膜厚度、新生內(nèi)膜面積(NIA)、內(nèi)彈力膜面積(IEM)、管腔狹窄指數(shù)(NIA/IEM)均大于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),C組各檢測(cè)指標(biāo)均小于B組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4、免疫組化結(jié)果:應(yīng)用專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件測(cè)得平均光密度值(OD值)進(jìn)行半定量分析,結(jié)

7、果:PTX3、CD68、PCNA在A組中有一定表達(dá)。B組三檢測(cè)指標(biāo)OD值均高于A、C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),C組PTX3OD值高于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C組CD68、PCNA表達(dá)量OD值高于A組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　5、PTX3mRNA及蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:A組、C組表達(dá)量均低于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A組表達(dá)量低于C組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PTX3蛋

8、白表達(dá)量分析結(jié)果同mRNA。
　　結(jié)論:1、利用氮?dú)飧稍锝Y(jié)合球囊擴(kuò)張術(shù)損傷犬頸動(dòng)脈內(nèi)膜,配合高脂飲食,能夠快速有效的建立犬頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2、正常頸動(dòng)脈組織中PTX3有一定表達(dá),頸動(dòng)脈支架置入術(shù)后PTX3在新生內(nèi)膜中表達(dá)明顯增加,說(shuō)明PTX3參與了支架內(nèi)再狹窄的形成。
　　3、法舒地爾能抑制PTX3基因和蛋白的表達(dá),減少巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),并抑制平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖,從而減輕新生內(nèi)膜形成,這一作用可能有利于支