p27KIP1對犬頸動脈支架置入后支架內(nèi)再狹窄影響及Rho激酶抑制劑法舒地爾的干預研究.pdf

1、目的：1、觀察比格犬通過球囊損傷結合氮氣干燥比格犬頸動脈內(nèi)皮細胞形成頸動脈粥樣硬化狹窄模型;2、支架植入術后P27(KIP1)對再狹窄過程中新生內(nèi)膜形成的作用,以及Rho激酶抑制劑法舒地爾的干預研究。方法:18只雄性比格犬,按照隨機的原則分為假手術組(A組, n=4)、動脈粥樣硬化狹窄造模組(E組,n=14,其中包含2只造模備用)。假手術組(A組)在分離出雙側頸總動脈后,不進行任何處理,然后縫合傷口,動脈粥樣硬化狹窄造模組雙側頸總動脈均

2、進行氮氣加球囊損傷內(nèi)皮細胞,造模后均給予高脂飲食2個月,造模2個月后在進行 DSA檢查,并將 E組隨機分為動脈粥樣硬化狹窄組(B組),單純支架組(C組),支架加藥物治療組(D)。在 C、D組比格犬右側頸總動脈中植入支架,之后普通飲食喂養(yǎng),在造模前、支架植入前3天和置入后7天,2個月分別行頸部血管彩超檢查,觀察頸總動脈斑塊形成及狹窄情況,支架置入后2個月時再次行 DSA檢查,了解頸部支架置入血管血流及有無充盈缺損情況。隨后取比格犬雙側頸總

3、動脈,將右側頸總動脈用于病理形態(tài)學檢測,以免疫組化法檢測 P27(KIP1)、增殖細胞核抗原(PCNA)、 a-平滑肌肌動蛋白。結果:1、在造模過程中有2只比格犬死亡,立即補上,在最后取血管標本的過程中,假手術組中有一只比格犬死亡,死亡原因可能均為麻醉意外所致,其余12只比格犬在取出雙側頸總動脈后,仍存活良好。
　　2、 HE染色示 A組(假手術組)無內(nèi)膜增生; B組(動脈粥樣硬化狹窄組)內(nèi)膜增生明顯,可見大量粥樣硬化斑塊、膽固醇

4、結晶以及新生內(nèi)膜;C組(單純裸支架組)可看到支架內(nèi)內(nèi)膜膜增生明顯,支架周圍可見炎性細胞聚集;D(支架加藥物治療組),可見不同程度的新生內(nèi)膜增生,支架周圍炎癥細胞聚集比較離散。
　　3、 P27(KIP1)免疫組化結果示A組(假手術組)中膜上可見較多棕黃色陽性顆粒,B組(動脈粥樣硬化狹窄組)、C組(單純支架組)中膜和內(nèi)膜均可以看到棕黃色陽性顆粒表達較少;D(支架加藥物治療組)中層棕黃色陽性顆粒表達更多、染色更深,內(nèi)膜部位表達較淺,

5、P27(KIP1)免疫組化光密度值在 A、B、C、D組相互比較中, A組最高,D組高于C組,差異具有統(tǒng)計學意義,P=0.000(0.05)。
　　4、a-平滑肌肌動蛋白免疫組織化學代表的增值平滑肌細胞的結果,其中A組(假手術組)表現(xiàn)為血管的中膜的平滑肌的細胞呈整齊的排列,有少數(shù)出現(xiàn)紊亂的表現(xiàn),無新生內(nèi)膜形成,表明經(jīng)過2個月的高脂飲食喂養(yǎng)后,平滑肌細胞出現(xiàn)輕微增殖、遷移的表現(xiàn),但尚未形成新生內(nèi)膜。B組(動脈粥樣硬化狹窄組)、C組(單

6、純裸支架組)、D組(支架+藥物治療組)中膜平滑肌細胞的排列較紊亂。法舒地爾能夠顯著抑制支架置入后平滑肌增生,進而影響新生內(nèi)膜形成。
　　5、增殖細胞核抗原免疫組化結果示 A組(假手術組)見少量弱陽性棕黃色顆粒表達,B(動脈粥樣硬化狹窄組)、C(單純支架組)組中增殖細胞核抗原陽性表達明顯多于 A組(假手術組),且主要位于中膜和內(nèi)膜中,C組(動脈粥樣硬化狹窄組)在支架周圍增殖細胞核抗原陽性顆粒較多,增殖細胞核抗原免疫組化光密度值在 A

7、(假手術組)、B(動脈粥樣硬化狹窄組)、C(單純支架組)、D組(支架+藥物治療組)組比較中,有統(tǒng)計學意義,P=0.000(0.05,表明支架長期炎性刺激使細胞增殖增多。
　　6、各指標之間相關性分析為了進一步了解頸動脈支架植入后內(nèi)膜增厚的原因,采用Pearson相關系數(shù)對各指標的相關性進行分析,P27(KIP1)與 a-平滑肌肌動蛋白、增殖細胞核抗原呈正相關,并且差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：1.采用氮氣干燥法結合球囊損傷內(nèi)

8、皮細胞,再飼以高脂飲食,能較好的建立比格犬頸總動脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2.比格犬頸動脈經(jīng)過球囊損傷和氮氣損傷內(nèi)皮細胞后增生的血管中層中PCNA和a-平滑肌肌動蛋白表達明顯增加, P27(KIP1)表達減少,表明P27(KIP1)減少可能通過促進平滑肌細胞的遷移和增殖,。
　　3、法舒地爾能夠顯著抑制支架置入后平滑肌增生內(nèi) P27(KIP1)表達下調(diào),進而影響新生內(nèi)膜形成。
　　結論：1、采用氮氣干燥法結合球囊損傷內(nèi)

9、皮細胞,再飼以高脂飲食,能較好的建立比格犬頸總動脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2、比格犬頸動脈經(jīng)過球囊損傷和氮氣損傷后內(nèi)皮細胞增生的血管中層中PCNA和a-平滑肌肌動蛋白表達明顯增加, P27(KIP1)表達減少,表明P27(KIP1)減少可能通過促進平滑肌細胞的遷移和增殖。
　　3、比格犬頸動脈支架置入后內(nèi)皮細胞增生明顯,血管壁中層中PCNA和a-平滑肌肌動蛋白表達明顯增加，法舒地爾組支架組新生內(nèi)膜形成明顯減弱，說明法舒地爾能