大鼠頸動脈球囊損傷后再狹窄形成中內膜增生和血管重塑的作用及CREG表達變化.pdf

1、研究背景及目的經皮冠狀動脈腔內成形術(PTCA)是冠心病治療學上的一項重大突破,但再狹窄的高發(fā)生率嚴重影響了PTCA的遠期療效.目前認為,再狹窄主要機理為擴張動脈段的彈性回縮、血管平滑肌細胞(VSMC)遷移與增殖、細胞外基質(ECM)合成、管壁重塑以及血栓的參與和機化.血管內皮損傷誘發(fā)的VSMC增殖及向內膜遷移、隨之引起的內膜增生被認為是PTCA術后再狹窄的主要病理機制.近年發(fā)現血管幾何構型改變,即血管重塑對PTCA術后管腔丟失亦具有重

2、要的作用.再狹窄形成過程中內膜增生與血管重塑的關系及在管腔丟失中兩者的協(xié)同作用,尚未完全闡明.VSMC由收縮表型向合成表型轉化是VSMC增殖與遷移的關鍵性起始步驟,但VSMC表型轉化的基因調控機制尚未明確.近期我們以人VSMC HITASY克隆株,采用差異顯示PCR法發(fā)現E1A激活基因細胞阻遏子(CREG)可能與VSMC的分化和表型調控有關.但CREG對VSMC功能的影響目前國內外尚未見報道.該研究采用了大鼠頸動脈內膜損傷模型,通過動態(tài)

3、觀察大鼠頸動脈內膜損傷后血管壁各成份結構的變化,檢測新生內膜中增殖細胞核抗原(PCNA)和平滑肌α肌動蛋白(SM α-actin)的表達變化及血管壁中CREG mRNA、蛋白表達的動態(tài)變化,旨在探討:(1)再狹窄形成過程中內膜增生與血管重塑的發(fā)生規(guī)律和兩者相互關系及在管腔丟失中兩者的協(xié)同作用.(2)再狹窄形成過程中VSMC增殖和表型轉化的規(guī)律及CREG在新生內膜增殖中的調控作用,為研究CREG防治增生性血管疾病的作用奠定基礎.實驗方法(

4、1)建立大鼠頸動脈內膜球囊損傷動物模型,術后不同時間點處死大鼠,取損傷區(qū)域的血管段制備標本、HE染色,形態(tài)學觀察.(2)應用計算機圖像分析,測算術后不同時間點血管腔面積、內膜和中膜厚度及面積、以及外彈力膜內橫截面積(EEL截面積).(3)采用TRIZOL法提取大鼠頸動脈的總RNA,以逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法,檢測大鼠頸動脈球囊損傷后不同時間點血管壁中CREG mRNA的動態(tài)變化.(4)以免疫組織化學染色方法,檢測大鼠頸動脈