C-,21-甾體糖苷的質譜研究.pdf

1、基于質譜快速、靈敏及準確的特性，它已成為高選擇、高通量篩選復雜天然藥物中活性成分的理想分析工具。尤其是它與高效液相等色譜分離技術聯(lián)用以及其多級串聯(lián)質譜技術的發(fā)展，能夠在線的快速提供大量有關化合物分子量以及分子結構信息，具有其它分析方法不可比擬的優(yōu)越性。本論文成功地應用了電噴霧串聯(lián)質譜高效液相色譜聯(lián)用技術，開展了黑鰻藤和蔓剪草提取物中快速篩選免疫活性的C<,21>甾體苷以及區(qū)分同分異構體的研究，并應用能量分辨質譜以及金屬誘導的質譜途徑對C

2、<,21>甾體苷的裂解規(guī)律進行了系統(tǒng)探討。 一)應用高效液相色譜/電噴霧串聯(lián)質譜法對黑鰻藤藤莖中具有免疫活性的C<,21>甾體苷進行快速篩選：經高效液相色譜分離的C<,21>甾體苷流分在線進入質譜，在全掃描的一級質譜中主要生成[M+Na]<'+>，觀察不到任何碎片的產生，因而可以準確地確定C<,21>甾體苷分子量。接著對[M+Na]<'+>進行多級串聯(lián)質譜研究，[M+Na]<'+>經碰撞誘導裂解，糖苷鍵斷裂，產生表征糖序列的特征

3、碎片離子，進而確定糖鏈的單糖序列；C<,21>甾體苷元母核上的側鏈中性丟失，依據中性丟失的分子量，可以推斷側鏈的組成。為了進一步確證，我們還對各流分進行了離線的高分辨傅立葉變換離子回旋共振多級串聯(lián)質譜研究，測定了分子離子以及各碎片離子的精確質量數，進而確證了各離子的元素組成。依據各C<,21>甾體苷的多級質譜裂解機理并對照標準品的液相保留時間，成功分離鑒定了10個具有免疫活性的C<,21>甾體苷，其中兩個是新化合物。高效液相色譜/電噴霧

4、串聯(lián)質譜法與質譜的選擇離子流圖相結合，依據“質譜指紋”，成功分離鑒定了黑鰻藤根部包括四組同分異構體在內的22個具有免疫活性的三糖基C<,21>甾體苷成分。其中有10個是新化合物。 二)基于多級串聯(lián)質譜實驗中能量分辨質譜可以用來區(qū)分同分異構體的特點，我們首先對已知C<,21>甾體苷進行系統(tǒng)的多級能量分辨質譜的研究，再結合高效液相色譜/電噴霧串聯(lián)質譜技術，依據C<,21>甾體苷的質譜裂解規(guī)律，成功分離鑒定了蔓剪草中的8個C<,21>

5、甾體苷，其中四個是新合物。 三)由于金屬離子常常能誘導化合物的質譜裂解模式發(fā)生改變，這為鑒定化合物結構提供了新的契機。我們對堿金屬(Li<'+>，Na<'+>，K<'+>，Cs<'+>)、堿土金屬(Ca<'2+>)以及過渡金屬離子(Fe<'2+>，Co<'2+>，Ni<'2+>，Cu<'2+>，Zn<'2+>)誘導的C<,21>甾體苷的質譜裂解機理進行了詳細系統(tǒng)的研究。并依據C<,21>甾體糖苷-過渡金屬離子復合物的質譜裂解機理