白首烏C-,21-甾體苷抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、惡性腫瘤是僅次于心血管疾病的第二大死因，而肝癌是居于我國(guó)第二位死因的惡性腫瘤，其死亡率在農(nóng)村僅次于胃癌，在城市僅次于肺癌?，F(xiàn)有的肝癌治療方法臨床療效并不理想，研究開(kāi)發(fā)抗肝癌藥物是我國(guó)面臨的重要抗癌任務(wù)。目前抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)已由單一的細(xì)胞毒類(lèi)藥物向多元化發(fā)展。中藥作為我國(guó)的傳統(tǒng)藥物，與其它藥物相比，在細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)、細(xì)胞通訊和免疫調(diào)節(jié)這三方面都有優(yōu)勢(shì)和潛力，不少中藥已在臨床或?qū)嶒?yàn)室證實(shí)能直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和提高荷瘤機(jī)體的免疫力。

2、江蘇地產(chǎn)白首烏是一傳統(tǒng)中藥，為蘿摩科植物耳葉牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的塊根，味甘、苦，性微溫，具有補(bǔ)肝腎、益精血等多種藥理功效，現(xiàn)代研究表明白首烏有防瘤抗瘤、清除自由基、增強(qiáng)免疫等功能。C<,21>甾體苷是白首烏中發(fā)現(xiàn)數(shù)量最多的也是最主要的活性成分，研究表明白首烏甾體苷在體外對(duì)多種癌細(xì)胞有殺傷作用，在體內(nèi)對(duì)艾氏腹水癌(EAC)、人肺癌細(xì)胞(Lewis)及肉瘤S180等都有明顯的抑制作

3、用。本實(shí)驗(yàn)用移植性肝癌實(shí)體瘤(Heps)為模型，觀察了C<,21>甾體苷抑制肝癌細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)作用，主要內(nèi)容如下： 1、對(duì)Heps的抑制作用和對(duì)免疫器官指數(shù)的影響 為了研究C<,21>甾體苷類(lèi)對(duì)肝癌機(jī)體的整體影響，我們構(gòu)建了小鼠移植性Heps模型，分別給予不同劑量的C<,21>甾苷灌胃，末次給藥24小時(shí)后處死小鼠，立即解剖剝離腫瘤組織及胸腺、脾臟，分別稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率和胸腺、脾臟指數(shù)，并對(duì)腫瘤組織進(jìn)行病理觀察。結(jié)果發(fā)

4、現(xiàn)，白首烏C<,21>甾苷三個(gè)劑量均能抑制Heps生長(zhǎng)，與模型組比較差異顯著(P<0.01)，三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)抑瘤率均在30％以上，顯示了穩(wěn)定的抗腫瘤活性，并呈一定的劑量．效應(yīng)關(guān)系；常規(guī)病理形態(tài)學(xué)觀察，白首烏各劑量組肝癌組織有明顯壞死區(qū)，伴有粒細(xì)胞浸潤(rùn)；另外，C<,21>甾體苷能降低小鼠荷瘤后異常增高的脾指數(shù)，升高胸腺指數(shù)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步說(shuō)明，白首烏C<,21>甾體苷有抑制肝癌生長(zhǎng)和免疫增強(qiáng)作用。 2、誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡及相關(guān)機(jī)制

5、 凋亡是細(xì)胞的程序性死亡，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和消亡過(guò)程中起著重要作用，利用藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡很有希望成為治療腫瘤的一條新途徑，將為包括肝癌在內(nèi)的腫瘤治療提供一個(gè)新思路。在第一部分抑制肝癌生長(zhǎng)和對(duì)腫瘤組織病理切片觀察的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)再進(jìn)一步對(duì)腫瘤組織進(jìn)行電鏡觀察，采用免疫熒光測(cè)定肝癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒作用，并用免疫組化染色檢測(cè)凋亡抑制基因蛋白bcl-2的表達(dá)。結(jié)果顯示用藥組電鏡下肝癌細(xì)胞有凋亡形態(tài)學(xué)改變，并可見(jiàn)凋亡小體；AO/EB雙熒光

6、染色證實(shí)了其有細(xì)胞毒作用，能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡；免疫組化結(jié)果顯示，肝癌組織中凋亡抑制基因蛋白bcl-2高表達(dá)，與模型組比較白首烏C<,21>甾苷能明顯降低bcl-2的表達(dá)(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示抑制過(guò)表達(dá)的bcl-2從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可能是其抗腫瘤機(jī)制之一。 3、對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞免疫功能的影響 單核巨噬細(xì)胞是體內(nèi)非常重要的免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)機(jī)體非特異性和特異性免疫應(yīng)答，在腫瘤免疫方面也起重要作用。本實(shí)驗(yàn)用腹腔巨噬細(xì)

7、胞吞噬中性紅檢測(cè)非特異性吞噬能力；用LPS激活腹腔巨噬細(xì)胞，以硝酸還原酶法檢測(cè)其分泌NO的量、雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)其誘生腫瘤壞死因子-a能力。用藥后，荷瘤機(jī)體的非特異性免疫功能增強(qiáng)，與模型組比較，白首烏C<,21>甾體苷各劑量組的巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力增強(qiáng)、分泌NO和TNF-a的量均進(jìn)一步增加，高于正常水平；但與腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能結(jié)果不一致的是高劑量組分泌NO的量略低于中劑量組。結(jié)果顯示白首烏C<,21>甾體苷能增強(qiáng)肝癌

8、小鼠的巨噬細(xì)胞免疫功能。 4、對(duì)脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響 腫瘤患者都有不同程度的免疫功能低下?tīng)顟B(tài)，而脾臟是機(jī)體重要的免疫器官。本實(shí)驗(yàn)用MTT法檢測(cè)脾臟的T、B淋巴細(xì)胞增殖，雙抗體央心 ABC-ELISA法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞誘生白細(xì)胞介素-2情況，結(jié)果顯示荷瘤小鼠的T、B細(xì)胞增殖力下降，IL-2分泌降低，而C<,21>甾體苷可顯著增強(qiáng)T、B淋巴細(xì)胞體外增殖力，使其接近正常水平，各劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞誘生IL-2水平也明顯提高，